[發(fā)明專利]結(jié)核分枝桿菌抗原特異性HLA-A*0201限制性表位肽及應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310047705.4
• 申請(qǐng)日: 2013-02-06
• 公開（公告）號(hào): CN103965289A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文金生;李強(qiáng);郭江龍;李靜;王思娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 溫州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C12N5/0783;A61K38/08;A61P31/06;G01N33/68
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)藥領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及結(jié)核分枝桿菌抗原特異性HLA-A*0201限制性表位肽及應(yīng)用。

背景技術(shù)

結(jié)核(Tuberculosis，TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)所引起的慢性傳染性疾病，其目前是全球感染性疾病死亡的主要病因之一。2010年度世界衛(wèi)生組織關(guān)于結(jié)核的報(bào)告指出：全球約1/3的人群感染過(guò)MTB，每年新增加大約940萬(wàn)感染者，且2009年度約有170萬(wàn)人死于結(jié)核。自1921年始，BCG(卡介苗)作為疫苗開始用于預(yù)防人類結(jié)核，然而，BCG的免疫效果并不太理想，表現(xiàn)為不能誘導(dǎo)持續(xù)性保護(hù)性免疫以及在免疫缺陷者(如艾滋病患者)中可恢復(fù)毒力進(jìn)而引起結(jié)核。

MTB株和BCG株的基因組對(duì)比實(shí)驗(yàn)顯示：各種MTB株中均存在一種獨(dú)特的基因區(qū)域RD-1(Region of difference1)，而BCG株則缺乏該基因區(qū)域。若將RD1基因插入BCG中，則可顯著提高BCG誘導(dǎo)保護(hù)性免疫的效率。RD1可編碼MTB特異性抗原PPE68(GenBank Accession：YP_007270600；368aa)，其表達(dá)于MTB細(xì)胞膜和細(xì)胞壁中的PPE68。大量研究證實(shí)：PPE68蛋白可以誘導(dǎo)強(qiáng)烈的CD8⁺T細(xì)胞(細(xì)胞毒性T細(xì)胞，CTL)反應(yīng)，其可保護(hù)小鼠抵抗MTB的感染；而且，PPE68還可在結(jié)核患者體內(nèi)誘導(dǎo)強(qiáng)烈的CTL反應(yīng)，改善結(jié)核患者預(yù)后。

由于目前BCG預(yù)防結(jié)核分枝桿菌的效果有限，因此迫切需要開發(fā)新的可用于防治結(jié)核性疾病的疫苗，尤其是安全性和特異性高的CTL表位肽疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供結(jié)核分枝桿菌抗原特異性HLA-A*0201限制性表位肽及應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種分離的多肽，所述的多肽是選自如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的多肽。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的多肽來(lái)源于結(jié)核分枝桿菌。

在另一優(yōu)選例中，所述的所述的多肽來(lái)源于抗原PPE68。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的多肽的用途，用于制備誘導(dǎo)發(fā)生細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)的藥物組合物。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ的細(xì)胞。

在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞是HLA-A*0201限制性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的多肽的用途，用于制備診斷或防治(預(yù)防或治療)結(jié)核分枝桿菌感染性疾病的藥物組合物。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的結(jié)核分枝桿菌感染性疾病包括(但不限于)：結(jié)核病。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種藥物組合物，所述藥物組合物含有：

有效量的所述的一種或多種多肽；和

藥學(xué)上可接受的載體。

在一個(gè)優(yōu)選例中，所述的藥物組合物是疫苗。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的藥物組合物的用途，用于制備誘導(dǎo)發(fā)生細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)的藥盒。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的藥物組合物的用途，用于制備診斷或防治(預(yù)防或治療)結(jié)核分枝桿菌感染性疾病的藥盒。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種藥盒，所述的藥盒中含有：一種或多種所述的多肽；或所述的藥物組合物。

本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。

附圖說(shuō)明

圖1、多肽PPE68_133-141的質(zhì)譜圖。

圖2、多肽PPE68_166-174的質(zhì)譜圖。

圖3、多肽PPE68_126-134的質(zhì)譜圖。

圖4、多肽PPE68_148-156的質(zhì)譜圖。

圖5、多肽與HLA-A*0201分子的結(jié)合力。圖中紅色實(shí)心圖為未加多肽的T2細(xì)胞的流式圖(背景對(duì)照)，黑色空心圖為加1μg/ml多肽的T2細(xì)胞的流式圖(實(shí)驗(yàn)組)，綠色空心圖為加10μg/ml多肽的T2細(xì)胞的流式圖(實(shí)驗(yàn)組)，藍(lán)色空心圖為加100μg/ml多肽的T2細(xì)胞的流式圖(實(shí)驗(yàn)組)。