[發明專利]一種基于點擊化學的肺炎多糖結合疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201310047502.5
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN103110940A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 胡濤;安文琪;蘇志國;范蓓;吳鼎龍;馬小偉;潘若文
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所;華蘭生物工程股份有限公司;華蘭生物疫苗有限公司
• 主分類號: A61K39/385
• 分類號: A61K39/385;A61K39/09;A61K47/48;A61P31/04
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種肺炎莢膜多糖結合疫苗，以共價鍵的方式將肺炎莢膜多糖連接到載體蛋白上，可用于預防肺炎鏈球菌的感染。

2.如權利要求1所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗，所述的載體蛋白為破傷風類毒素。

3.權利要求1所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法，其特征在于，制備的步驟包括：（1）肺炎莢膜多糖在酸性條件下水解；（2）由高碘酸鈉氧化肺炎莢膜多糖，多糖中的鄰位羥基氧化成醛基；（3）向氧化的肺炎莢膜多糖引入乙炔基團；（4）向破傷風類毒素引入疊氮基團；（5）將乙炔化的肺炎莢膜多糖與疊氮化的破傷風類毒素進行結合反應。

4.如權利要求3所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，肺炎莢膜多糖在50mM的醋酸鈉緩沖液（pH4.7）中水解20-60分鐘，水解溫度為60-90℃；優化的條件為水解30分鐘，水解溫度為75℃。

5.如權利要求3所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，高碘酸鈉氧化肺炎莢膜多糖的pH值為5.5-6.0，避光反應5-120分鐘；優化的氧化條件為pH值為5.8，避光反應10分鐘。

6.如權利要求3所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，由結構式為H₂N-R-C≡CH的試劑來衍化高碘酸鈉氧化的肺炎莢膜多糖，同時引入乙炔基團。其中，R是碳數在0-20之間的烷基；優化的試劑為氨基乙炔。

7.如權利要求6所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，氨基乙炔衍化高碘酸鈉氧化的肺炎莢膜多糖的反應條件為：在氰基硼氫化鈉存在的情況下，氧化的多糖與氨基乙炔在20-40℃反應4-15小時，pH為7-8；優化的條件為于37℃反應6小時，pH為7.4。

8.如權利要求6所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，氨基乙炔衍化高碘酸鈉氧化的肺炎莢膜多糖過程氧化的多糖與氨基乙炔的質量比為1:(0.5～5)；優化的質量比為1:2。

9.如權利要求3所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，用疊氮-甲酰琥珀酰亞胺活化破傷風類毒素，同時引入疊氮基團。

10.如權利要求9所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，疊氮-甲酰琥珀酰亞胺與破傷風類毒素的摩爾比為(5-60)：1，活化反應的pH值為6.0-8.0，反應溫度為2-15小時；優化的活化反應條件為摩爾比為20：1，活化反應的pH值為7.4，于室溫下反應4小時。

11.如權利要求3所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法,其特征在于，（1）用2-亞氨基硫烷在破傷風類毒素上引入巰基，（2）疊氮-甲酰琥珀酰亞胺的琥珀酰亞胺基團與N-(2-氨乙基)馬來酰亞胺的氨基基團反應，在疊氮-甲酰琥珀酰亞胺上引入馬來酰亞胺基團，（3）馬來酰亞胺化的疊氮-甲酰琥珀酰亞胺與巰基化的破傷風類毒素反應，在破傷風類毒素上引入疊氮基團。

12.如權利要求11所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法，其特征在于，破傷風類毒素與2-亞氨基硫烷反應的摩爾比為1:(10-60)，反應pH值為6.0-8.0，反應1-24小時，于室溫下反應；優化的反應條件為摩爾比為1:20，反應pH為7.4，反應4小時。

13.如權利要求11所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法，其特征在于，疊氮-甲酰琥珀酰亞胺與N-(2-氨乙基)馬來酰亞胺以摩爾比1:(0.5-4)的比例混合反應，反應pH值為6.0-8.0，反應0.5-4小時，于室溫下反應；優化的反應條件為摩爾比為1:1，反應pH為7.4，反應1小時。

14.如權利要求11所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法，其特征在于，馬來酰亞胺化的疊氮-甲酰琥珀酰亞胺與巰基化的破傷風類毒素以摩爾比1:(10-60)混合反應，反應pH值為6.0-8.0，反應1-24小時，于室溫下反應；優化的反應條件為摩爾比為1:20，反應pH為7.4，反應4小時。

15.如權利要求3所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗的制備方法，其特征在于，在CuSO₄和抗壞血酸存在的情況下，將乙炔化的肺炎莢膜多糖與疊氮化的載體蛋白以質量比(0.5～5):1混合反應；優化的質量比為2:1。

16.如權利要求1所述的肺炎莢膜多糖結合疫苗制劑是注射劑型。