[發明專利]一種檢測有關辣椒辣度基因的試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201310046988.0
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103074442A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 李永忠;滕凌;張娟;路易斯伊格納羅;葉亞東;朱文華;王潤華;全利;潘鸝;胡娟;肖慧;葉汝章;楊紫俊;張俊;霍世元
• 申請（專利權）人: 常州亞當生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測有關辣椒辣度基因的試劑盒，其特征在于含有如下引物：

pun1?A：5'?ATTCTTGATCATCCTCATGCATC?3'???

pun1?B：5'?CACAAATTTTGTCCGATCTCAAC?3'???????

pun1?C：5'?TTTGTTGCTTGTGCAACATCACC?3'

pun1^2?F：5'?AAGGTGGTAATTTGCTTGTAGTTC?3'

pun1^2?R：5'?CACCTTCAATCCCAAATTAATGTC?3'????

pun1³?D：5'?TTGGGATTGAAGGTGGCAGAAG?3'?????

pun1³?E：5'?GAAGAAGGCATTCTTGGAGGG?3'

pun1³?F：5'?TCATGTCCATTCGGCCAAACAGTG?3'?。

2.根據權利要求1所述的一種檢測有關辣椒辣度基因的試劑盒，其特征包括PCR緩沖液10x?PCR?buffer?2.5?μL，2.5?mM?dNTPs，1?μL；聚合酶Taq?polymerase?0.25μL，20?ng/μL基因組DNA，引物為10?μM；加H₂O至25?μL；

其中10x?PCR?buffer為含有100?mM?Tris-HCl,?pH?8.8，500?mM?KCl，15?mM?MgCl₂，0.8%?v/v?Nonidet?P40的混合物；

引物：?pun1?A，pun1?B，pun1?C各0.25?μL；

pun1²?F，pun1²?R各0.25?μL；

pun1³?D，pun1³?E，pun1³?F各0.25?μL。

3.根據權利要求1或2所述的一種檢測辣椒辣度的試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括盒體，11個試劑管，其中第1-8分別放置引物pun1?A，pun1?B，pun1?C、?pun1²?F，pun1²?R、pun1³?D，pun1³?E，pun1³?F；第9試劑管放置PCR緩沖液；第10管放置dNTPs?；第11管放置聚合酶Taq?polymerase。

4.根據權利要求1-3任意一種檢測辣椒辣度的試劑盒的方法，其特征在按如下步驟實現：

A、提取辣椒基因DNA：

B、10x?PCR?buffer?2.5?μL，2.5?mM?dNTPs，1?μL；Taq?polymerase?0.25μL，20?ng/μL基因組DNA，引物為10?μM；加H₂O至25?μL；其中10x?PCR?buffer為含有100?mM?Tris-HCl,?pH?8.8，500?mM?KCl，15?mM?MgCl₂，0.8%?v/v?Nonidet?P40的混合物；

引物：pun1突變：pun1?A，pun1?B，pun1?C各0.25?μL；pun1²突變：pun1²?F，pun1²?R各0.25?μL；pun1³突變：pun1³?D，pun1³?E，pun1³?F各0.25?μL；

C、PCR反應條件：94°C，4?min；[?94°C，30?s；60°C，1?min；72°C，2?min?]，35x；72°C，10?min，PCR結果通過1%的瓊脂糖凝膠電泳分析。