[發明專利]防治煙草青枯病拮抗菌及其應用

有效

• 申請號: 201310046171.3
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103146600A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 李紅麗;盧阿虔;王巖
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;A01N63/04;A01N63/00;A01P1/00;C05F11/08;C12R1/085;C12R1/685
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

本發明涉及防治煙草青枯病拮抗菌，同時還涉及該拮抗菌在防治煙草土傳病害方面的應用，屬于生物防治領域。

背景技術

煙草青枯病是一類重要的煙草土傳病害，它通常侵染煙草根部，引起作物根部乃至全株的病害，造成重大的經濟損失。煙草青枯病是一種由布可氏桿菌（Ralstonia?solanacearum）引起的系統性侵染病，煙株一旦染病往往造成整株死亡，其危害往往是毀滅性的，因此常常給煙草生產造成重大經濟損失。煙草青枯病病原菌主要隨植物殘體遺落于土壤中越冬，也能在種子內或田間其它寄主體內越冬，帶菌的土壤、病殘組織和含有病菌的有機肥料等是該病的主要初染源，病害的傳播主要靠灌溉水、雨水、帶病苗、農具、病土以及人畜的活動等。

目前，生產上主要采用抗病品種和作物輪作等農業措施來防治煙草土傳病害病，但是由于抗病品種需要抗病基因多樣化，并且受環境的影響比較大，防治效果不理想。作物輪作也是防治煙草青枯病的有效方法之一，但是由于我國人多地少，生產中正常的輪作措施無法實現。植物病理學家認為植物發病與寄主、病原菌和環境這三個因素有密切關系，當病原菌與易感寄主相遇在適宜的環境中，植物就開始發病，如果修改或根除這三者中的任何一個，就可以減輕或控制植物病害。

大量研究表明，煙田土壤中不僅存在引起煙草病害的微生物而且也存在多種多樣的非致病性的、提高煙草生命力的有益微生物，因而煙草的生物防治以及生態防治日益受到重視。生物防治措施是利用有益微生物降低植物病原菌對植物的危害，生態防治則是通過向土壤引入拮抗微生物、培肥土壤和提高土壤中生物多樣性等措施，進而使土壤微生態達到平衡，最終通過土壤中不同生物之間的拮抗與競爭實現對土壤病害的防治。

發明內容

本發明的目的是提供防治煙草青枯病拮抗菌。

為了實現以上目的，本發明所采用的技術方案是提供防治煙草青枯病拮抗菌，所述的拮抗菌為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus?cereus)QJ-1和黑曲霉（Aspergillusniger）Ty-3；其中，蠟狀芽孢桿菌(Bacillus?cereus)QJ-1，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，保藏地址：中國武漢武漢大學，保藏日期：2012年7月5日，保藏號：CCTCC?NO:M2012271；黑曲霉（Aspergillus?niger）Ty-3，保藏單位：中國典型培養物保藏中心，保藏地址：中國武漢武漢大學，保藏日期：2011年7月8日，保藏號：CCTCC?NO:M2011241。

本發明防治煙草青枯病拮抗菌的篩選方法，包括以下步驟：

1）病原菌分離

選取煙草青枯病發病的煙株，對煙桿進行清洗、消毒，取煙桿上病斑，將感病部位維管束組織切塊后放入牛肉膏蛋白胨細菌平板培養；待青枯病病原菌生長為菌絲時，挑取菌落純化、培養，接種于牛肉膏蛋白胨斜面保存；

2）病原菌致病性鑒定

播撒煙草種子，待煙株生長至有維管束組織時，破壞煙草根部并將培養好的青枯病病原菌的菌懸液倒入根部，保持高溫高濕，30d后觀察發病情況；

3）土壤微生物的分離

取染病煙株根際周圍的土壤，加入無菌水，震蕩后靜置，對土壤溶液進行濃度梯度稀釋，取稀釋溶液分別在牛肉膏蛋白胨培養基、高氏一號培養基和孟加拉紅培養基上均勻涂布，培養，挑取單菌落純化并接種至相應的斜面培養基保存；

4）拮抗菌篩選

將培養的不同土壤微生物與青枯病的病原菌在NA培養基上進行對峙培養，判斷有無拮抗作用；

5）拮抗作用測定

用無菌水洗出青枯病病原菌，制備菌懸液，并將菌懸液與NA培養基混合，放置凝固成平板，將對峙培養測出的具有拮抗作用的土壤微生物單個和兩兩混合接種在平板上培養，測定土壤微生物對病原菌的抑菌斑或抑菌帶的大小；

6）對拮抗菌進行形態學觀察；

7）對拮抗菌進行鑒定分類。

本發明的目的還在于提供防治煙草青枯病拮抗菌在微生物菌劑方面的應用。

本發明所采用的技術方案還在于提供防治煙草青枯病拮抗菌在微生物菌劑方面的應用。