[發(fā)明專利]一株短小芽孢桿菌及其在防治小麥禾谷孢囊線蟲病中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310046055.1
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103103155A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王琦;李洪濤;李燕
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01N63/00;A01P5/00;C12R1/07
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株短小芽孢桿菌及其在防治小麥禾谷孢囊線蟲病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

禾谷孢囊線蟲又名燕麥孢囊線蟲（Heterodera?avenae?Wollen-weber?1924，Cereal?Cyst?Nematodes，簡稱CCN），為世界性禾谷類作物的病原線蟲，現(xiàn)已對我國11個省市（自治區(qū)、直轄市）的小麥造成危害，而且逐年加重，成為小麥生產(chǎn)上的主要病害。目前對小麥禾谷孢囊線蟲病的防治主要是化學(xué)防治和抗病品種的利用。具有較好防效的化學(xué)殺線劑，如鐵滅克(Temik)、呋喃丹（Furadan）等，屬于高毒農(nóng)藥，存在毒性大、成本高、污染環(huán)境、危害人類健康等問題，在生產(chǎn)上不能得到推廣應(yīng)用。選育抗禾谷孢囊線蟲新品種是防治根線蟲病最為有效的方法，但是已鑒定的抗禾谷孢囊線蟲基因普遍存在于小麥近源屬（如大麥屬、燕麥屬、山羊草屬等）中，來源于六倍體小麥的抗禾谷孢囊線蟲基因十分有限，使得抗病育種進(jìn)展緩慢。禾谷孢囊線蟲種內(nèi)存在嚴(yán)重致病型分化現(xiàn)象，抗性基因?qū)Σ煌虏⌒偷暮坦孺吣揖€蟲具有不同抗性，導(dǎo)致品種抗性分布不穩(wěn)定，很容易造成抗性品種抗性的丟失。目前我國種植的小麥品種中還沒有發(fā)現(xiàn)對禾谷孢囊線蟲完全免疫的品種。

源于對環(huán)境友好、綠色無公害、有利于人類健康，生物防治在植物病害防治研究中一直處于熱點。雖然國內(nèi)外在植物寄生線蟲生防細(xì)菌的種類、篩選、防治效果和土壤添加劑等方面也有了一些研究，但生產(chǎn)上還沒有應(yīng)用效果穩(wěn)定的生防制劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一株短小芽孢桿菌及其在防治小麥禾谷孢囊線蟲病中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的菌株屬于短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus），命名為B202，已于2012年03月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號），保藏號為CGMCC?No.5838。短小芽孢桿菌（Bacillus?pumilus）B202?CGMCC?No.5838簡稱短小芽孢桿菌B202。

本發(fā)明還保護(hù)短小芽孢桿菌B202在制備小麥禾谷孢囊線蟲生防制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還保護(hù)一種小麥禾谷孢囊線蟲生防制劑，其活性成分為如下（a）、（b）、（c）和（d）中的至少一種：（a）短小芽孢桿菌B202的發(fā)酵培養(yǎng)物（包括發(fā)酵上清和菌體）；（b）短小芽孢桿菌B202；（c）短小芽孢桿菌B202的芽孢；（d）短小芽孢桿菌B202的發(fā)酵上清。

本發(fā)明還保護(hù)一種防治植物發(fā)生小麥禾谷孢囊線蟲病的方法，包括在播種前將待測植物種子進(jìn)行如下處理的步驟：用短小芽孢桿菌B202的芽孢懸浮液對待測植物的種子進(jìn)行浸種處理。所述待測植物具體可為小麥（小麥品種“溫麥19”）。所述短小芽孢桿菌B202的芽孢懸浮液的具體制備方法如下：將短小芽孢桿菌B202的芽孢懸浮于無菌水，得到芽孢濃度為8×10⁸個/ml的芽孢懸浮液。所述浸種的時間具體可為1小時。

本發(fā)明還保護(hù)另一種防治植物發(fā)生小麥禾谷孢囊線蟲病的方法，包括將待測種子進(jìn)行如下處理的步驟：（1）將待測植物種子用短小芽孢桿菌B202的菌體浸種；（2）將完成步驟（1）的種子催芽，得到幼苗；（3）將步驟（2）得到的幼苗用短小芽孢桿菌B202的發(fā)酵上清灌根。

所述待測植物具體可為小麥（小麥品種“溫麥19”）。

所述短小芽孢桿菌B202的發(fā)酵培養(yǎng)物具體按照如下方法制備：將短小芽孢桿菌B202接種到NA改良培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)得到OD_600nm=4.0的發(fā)酵培養(yǎng)物。

所述短小芽孢桿菌B202的發(fā)酵上清具體按照如下方法制備：將所述發(fā)酵培養(yǎng)物4000rpm離心30min，收集上清液。

NA改良培養(yǎng)基（pH7.0）由溶劑和溶質(zhì)組成；所述溶劑為水；所述溶質(zhì)及其濃度如下：3g/L牛肉膏、5g/L蛋白胨、3g/L葡萄糖。

采用芽孢桿菌（Bacillus?spp.）進(jìn)行生物防治具有如下優(yōu)勢：適應(yīng)性廣；作用機(jī)制多樣，不易產(chǎn)生抗藥性；發(fā)酵周期短，生產(chǎn)成本低；形成芽孢、易儲運(yùn)；環(huán)境友好，對人畜安全。

本發(fā)明提供了一株短小芽孢桿菌B202，通過室內(nèi)殺線活性、溫室盆栽和田間試驗篩選證明其對小麥禾谷孢囊線蟲病具有穩(wěn)定防治效果，為小麥禾谷孢囊線蟲生防制劑的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為B202菌株的形態(tài)(10倍放大的照片)。

圖2為B202菌株的形態(tài)(40倍放大的照片)。