[發明專利]一種人胚肺成纖維二倍體細胞株SLF-1及其應用

有效

• 申請號: 201310045921.5
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103255102A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 王一丁;王琳;呂哲;李雅靜;張燕;高強;董珊珊;尹衛東
• 申請（專利權）人: 北京科興中維生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及一種人胚肺成纖維二倍體細胞SLF-1與應用。?

背景技術

人二倍體細胞來源于正常人組織，可以進行體外有限壽命的傳代培養，保留原體內的細胞特征，具有正常人二倍體染色體數目，核型正常，無腫瘤原性。作為疫苗生產用細胞基質，人二倍體細胞能夠解決原代細胞和傳代細胞系的很多問題，通過全面檢定可以建立質量均一、數量充足的細胞庫；無內外源因子污染；無致腫瘤性風險，故無須考慮細胞蛋白和DNA殘留量。人二倍體細胞與人抗原性一致，能將疫苗過敏反應的可能性降到最低。尤其對于青少年和嬰幼兒的計劃免疫，其能大大提高疫苗的安全性。目前國際上用于疫苗生產的人二倍體細胞主要有WI-38和MRC-5，其均為上世紀60年代分離，目前歐美等發達國家市場上使用這兩種細胞生產的疫苗產品主要有凍干人用狂犬病疫苗、麻疹減毒活疫苗、風疹減毒活疫苗、甲肝滅活疫苗、水痘減毒活疫苗和脊髓灰質炎滅活疫苗等，由于MRC-5細胞的生長性狀和病毒敏感性均優于WI-38，故其擁有更廣泛的應用。國內用于疫苗生產的人二倍體細胞主要有2BS和KMB-17，其均為上世紀70年代分離，國內市場上使用這兩種細胞生產的疫苗產品主要有麻疹減毒活疫苗風疹減毒活疫苗、甲肝減毒活疫苗、甲肝滅活疫苗、水痘減毒活疫苗，脊髓灰質炎減毒活疫苗等。以人二倍體細胞為基質生產的疫苗產品近40年的使用經驗充分證明了人二倍體細胞作為疫苗生產用細胞基質具備良好的安全性和有效性。在疫苗產品安全性越來越受到關注的今天，人二倍體細胞?以其自身的優勢成為疫苗生產用細胞基質的重要選擇之一。?

人二倍體細胞也存在一些缺點阻礙其在疫苗生產中的廣泛應用，主要是疫苗生產成本較高，具體表現在細胞繁殖代次有限，培養條件要求較高，生產時間較長，培養規模難于放大，生產時病毒產量較低。目前國內外使用的人二倍體細胞存在的主要問題體現在兩個方面：?

一是缺乏較早代次的原始細胞種子，細胞極限壽命較短，細胞培養難度大，培養成本高且病毒敏感性不理想。作為國際認可用于疫苗生產的人二倍體細胞株MRC-5和WI-38來說，其均為上世紀60年代分離培養制得，兩株細胞的極限壽命均為50代左右，故其生產使用代次應控制在33代以內。目前能從美國菌種保藏中心（ATCC）購買到的MRC-5細胞最早代次為10代，因此在18代間隔內，要制備工作細胞庫并用于生產，細胞很難增殖到較大的生產規模，也正因為細胞代次較高，細胞培養的難度加大，細胞數量直接影響病毒的活性和產量；培養成本增加直接影響產品的售價。以巴斯德公司的凍干狂犬病疫苗為例，其擁有人二倍體細胞基質和vero細胞基質的兩種疫苗產品。由于MRC-5細胞的培養成本高，病毒產量少導致疫苗價格昂貴，因此安全性更高的人二倍體細胞基質的狂犬病疫苗只在歐美等發達國家內銷售。由此可見，擁有原始細胞庫從而能夠有較多使用代次的細胞對于疫苗的生產來說至關重要。?

另一個問題是細胞的使用權限和范圍的限制。MRC-5細胞雖然是國際認可的疫苗生產用人二倍體細胞株，但從ATCC購買來的細胞一般僅可以用于研究，如果用于生產則需要支付高昂的國際生產許可費，即使通過WHO獲得可用于生產的該細胞株數量也是非常有限的，嚴重阻礙更多品種疫苗的開發和生產。國內主要用于疫苗生產的兩株人二倍體細胞2BS和KMB-17也有各自的使用權限，且?未獲得國際認可，使用范圍受到限制。?

因此，現有的這些人二倍體細胞株已經無法滿足目前疫苗生產的需求。近幾十年科技的發展使得細胞培養和檢定技術有了很大的進步。本發明涉及開發制備遺傳背景清晰、生長狀態良好并對多種病毒敏感的人二倍體細胞株作為生產疫苗的細胞基質，不僅可以提高疫苗的質量、降低生產成本，還可以快速推動以新人二倍體細胞為基質的新型疫苗的開發和產業化進程。?

目前由人二倍體細胞進行規模化生產的病毒種類包括水痘帶狀皰疹病毒、風疹病毒、脊髓灰質炎病毒、甲肝病毒、狂犬病毒和EV71病毒等，但是由于目前使用的多種人二倍體細胞存在所述的問題，因此，發明一種生物特性良好、病毒適應范圍廣范、生產病毒較容易的人二倍體細胞基質成為疫苗生產工藝提升的迫切需求。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種人胚肺成纖維二倍體細胞株；本發明的另一目的在于提供該二倍體細胞株的應用。?