[發(fā)明專利]馬布特羅膠體金試紙條及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310045715.4
• 申請(qǐng)日: 2013-02-05
• 公開（公告）號(hào): CN103149352A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴衛(wèi)華;劉道峰;鄧省亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西中德生物工程有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/544;G01N33/532;C07K14/765;C07K16/44
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種馬布特羅膠體金試紙條，其特征在于，包括：

底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向，所述底板上依次形成有樣品墊、結(jié)合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，

其中，所述結(jié)合物墊上含有膠體金標(biāo)記的抗馬布特羅單克隆的抗體，

所述硝酸纖維素膜上進(jìn)一步形成有檢測線和質(zhì)控線，所述檢測線由能與抗馬布特羅單克隆抗體結(jié)合的馬布特羅檢測抗原線狀點(diǎn)樣組成，所述質(zhì)控線由能與抗馬布特羅單克隆抗體結(jié)合的驢抗小白鼠抗體線狀點(diǎn)樣組成。

2.一種制備權(quán)利要求1所述的馬布特羅膠體金試紙條的方法，其特征在于，包括下列步驟：

制備硝酸纖維素膜，所述硝酸纖維素膜上形成有檢測線和質(zhì)控線；

制備結(jié)合物墊；以及

組裝試紙條，

其中，

用能與抗馬布特羅單克隆抗體結(jié)合的馬布特羅檢測抗原在所述硝酸纖維素膜上進(jìn)行線狀點(diǎn)樣作為檢測線；

用能與抗馬布特羅單克隆抗體結(jié)合驢抗小白鼠抗體在所述硝酸纖維素膜上進(jìn)行線狀點(diǎn)樣作為質(zhì)控線。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，用于制備檢測線的馬布特羅檢測抗原是通過下列方法獲得的：

稱取50mg馬布特羅，用10mL?pH1.0的蒸餾水將其溶解作為A液，稱取60mg亞硝酸鈉用2mL蒸餾水將其溶解作為B液，稱取232mg?BSA，用pH8.00.01M的PBS溶解作為C液；

冰浴條件下把B液緩慢滴入A液中，4℃磁力攪拌反應(yīng)4小時(shí)后，在冰浴條件下將其緩慢地加入C液中，加完后調(diào)pH至8.0，室溫磁力攪拌反應(yīng)過夜；以及

最終產(chǎn)物用0.01M?pH7.4的PBS透析除去雜質(zhì)得到用于制備檢測線的馬布特羅偶聯(lián)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，其特征是用于制備質(zhì)控線的抗體是通過下列步驟獲得的：

通過在驢體內(nèi)注射小白鼠免疫球蛋白，并提取含抗體的血清經(jīng)純化后制得的，以便獲得用于制備質(zhì)控線的抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述檢測線和質(zhì)控線是通過下列步驟獲得的：

將硝酸纖維素膜按20~30mm寬的尺寸剪裁；將經(jīng)純化濃度調(diào)整為0.2~1.0mg/mL的馬布特羅檢測抗原，在膜上線狀點(diǎn)樣作為檢測線，其中，檢測線點(diǎn)樣位置離膜底邊15~18mm；

將經(jīng)純化濃度調(diào)整為0.5~1.5mg/mL的驢抗小白鼠免疫球蛋白抗體，在膜上線狀點(diǎn)樣作為質(zhì)控線，質(zhì)控線點(diǎn)樣位置離膜底邊11~13mm；

將所述硝酸纖維素膜室溫干燥30min，置于1%牛血清白蛋白的生理鹽水中浸泡30min，取出吸干水分，于37攝氏度下孵育30min。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，結(jié)合物墊是通過下列步驟獲得的：

選用能與馬布特羅結(jié)合的抗馬布特羅單克隆抗體標(biāo)記膠體金；以及

把經(jīng)過標(biāo)記的膠體金，分散在玻璃纖維紙上。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，用于標(biāo)記膠體金的能與馬布特羅結(jié)合的抗馬布特羅單克隆抗體是通過下列步驟制備的：

按Davis的方法將馬布特羅—蛋白復(fù)合體溶于同體積的磷酸生理鹽水和完全佐劑中，免疫BALB/C小鼠，取小鼠脾臟與SP2/O小鼠骨髓細(xì)胞融合，融合細(xì)胞在選擇性培養(yǎng)液中培養(yǎng)7~14d，采用間接競爭ELISA方法篩選分泌抗體的雜交細(xì)胞株，雜交細(xì)胞株進(jìn)行三次克隆化，將所產(chǎn)生的克隆細(xì)胞株注入小鼠腹腔產(chǎn)生腹水，經(jīng)純化后得到用于標(biāo)記膠體金的能與馬布特羅結(jié)合的抗馬布特羅單克隆抗體。