[發明專利]一種能抑制前列腺癌的海洋功能食品及其制備方法

無效

• 申請號: 201310045683.8
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103071144A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 李麗;朱亞珠;黃芳芳;丁國芳
• 申請（專利權）人: 浙江國際海運職業技術學院
• 主分類號: A61K38/01
• 分類號: A61K38/01;A61P35/00;A61P13/08;C07K1/12
• 代理公司: 金華科源專利事務所有限公司 33103
• 代理人: 胡杰平

技術領域

本發明屬于海洋功能食品類，具體是一種能抑制前列腺癌的海洋功能食品及其制備方法。

背景技術

在歐美國家前列腺癌(prostate?cancer，PCa)的發病率處于男性惡性腫瘤的第一位，死亡率僅次于肺癌，居第二位。近幾年來，我國隨著人口老齡化，PCa的發病率也有明顯上升趨勢，己成為影響老年男性健康的一大疾患，雖然PCa的發病率低于歐美國家，但死亡率卻遠高于歐美國家。對于雄激素非依賴型前列腺癌，目前還是沒有效的治療方法，且容易復發，抗雄激素治療無效。所以對雄激素非依賴型前列腺癌缺乏有效的治療是臨床前列腺癌治療的最大難題，研究者一直尋找有效治療雄激素非依賴型前列腺癌的活性物。從理論上講，腫瘤的發生是一個復雜過程，其中細胞增殖與凋亡失衡是重要因素之一，所以抑制腫瘤細胞的增殖、誘導凋亡是探索抗腫瘤藥物的重要思路之一，前列腺癌也是如此。海洋是生命的起源地，海洋環境又具有高鹽、高壓、低溫等迥異于陸地環境的特點，許多海洋生物在這種極端環境中產生了大量不同于陸地生物的活性物質，其結構新穎，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗衰老、增強機體免疫力等活性物質。其中抗腫瘤活性物質最為引人矚目，已經成為全世界科學家們研究的熱點。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種從海洋魷魚墨中提取的對DU-145和PC-3細胞有增殖抑制作用、能誘導DU-145和PC-3細胞早期凋亡的從而能抑制前列腺癌的海洋功能食品，并公開其制備方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明一種能抑制前列腺癌的海洋功能食品，其特征為：它是由魷魚墨酸法提取制成的魷魚墨多肽活性物。

本發明所述魷魚墨多肽活性物的制備方法是：將預處理過的魷魚墨加入鹽酸，鹽酸濃度為0.02-0.03mol/L、酸提料液比(雙蒸水：原料魷魚墨體積比)1：1-2、酸解時間2-3小時、酸解溫度35℃-40℃浸提，并最后對浸提液離心得到的清液即為粗制的魷魚墨多肽活性物。

本發明酸法提取中可加入丙酮脫脂，丙酮的加入量為原料魷魚墨體積1-2倍。

本發明采用豐富的海洋生物魷魚墨，用酸法提取、濃縮等方法提純魷魚墨多肽，并通過正交試驗得到最佳酸解工藝，得到最多的魷魚墨多肽活性物。通過CCK-8法檢測表明魷魚墨多肽對前列腺癌的DU-145、PC-3細胞有顯著的增殖抑制作用，且隨著魷魚墨多肽濃度的增加，其抑制率逐漸升高，存在明顯的劑量依賴性。本發明的魷魚墨多肽能抑制DU-145、PC-3細胞增殖，并誘導其凋亡的發生，從而抑制前列腺癌。

具體實施方式

一、酸法提取魷魚墨多肽的工藝方法的選擇

從魷魚墨中酸法提取魷魚墨多肽的影響因素有酸提料液比、酸的種類、酸解溫度、酸解時間，由于氨基氮含量越高，酸解程度越大，所以可以以氨基氮含量為指標，通過酸的選擇、反應時間、酸濃度以及反應溫度對氨基氮含量影響規律，確定單因素的最佳取值，再通過正交試驗對酸解條件參數進行進一步優化，得出各因素對酸法提取魷魚墨多肽酸法提取魷魚墨多肽最佳組合為鹽酸濃度為0.02-0.03mol/L、酸提料液比(雙蒸水：原料魷魚墨體積比)1：1-2、酸解時間2-3小時、酸解溫度35℃-40℃，尤其是在0.02mol/L鹽酸、酸提料液比1：1、酸解時間2h、酸解溫度35°C條件下，酸解程度最高，制得的魷魚墨多肽最佳。

另外，由于魷魚墨在酸解中有無脫脂對酸解度的影響顯著，魷魚墨被脫脂后的酸解度明顯降低，所以可以在酸解過程中加入丙酮脫脂，丙酮加入量為原料魷魚墨體積1-2倍。

二、通過CCK-8法檢測所提取得魷魚墨多肽對DU-145和PC-3的生長抑制作用。

不同濃度的魷魚墨多肽作用于PC-3和DU-145細胞24h，采用CCK-8法測定其對細胞增殖的抑制率，結果顯示魷魚墨多肽對DU-145、PC-3細胞有顯著的增殖抑制作用，且隨著魷魚墨多肽濃度的增加，其抑制率逐漸升高，存在明顯的劑量依賴性。

三、采用Annexin?V-FITC/PI雙標記流式細胞術檢測和AO/EB雙染法，觀察所提取的魷魚墨多肽對DU-145和PC-3細胞的早期凋亡情況。