[發明專利]一種冬蟲夏草發酵菌絲體活性組分的發酵及提取方法

有效

• 申請號: 201310045628.9
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103141298A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 程俊文;付立忠;賀亮;魏海龍;胡傳久;李海波
• 申請（專利權）人: 浙江省林業科學研究院
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04;A23L1/28
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;冷紅梅

1.一種冬蟲夏草發酵菌絲體活性組分的發酵及提取方法，所述方法包括：

（1）種子液制備：液體種子培養基經滅菌后接入中國被毛孢菌株，50~300rpm、10~30℃下振蕩培養2~35天，得到種子液；所述液體種子培養基組成如下：碳源0.5～4%，氮源0.1～2%，KH₂PO₄0.01~0.5%，MgSO₄0.01~0.5％，溶劑為水，pH6.0~7.0；所述碳源為下列之一或其中兩種以上的混合物：葡萄糖、蔗糖、玉米粉；所述氮源為下列之一或其中兩種以上的混合物：蛋白胨、酵母粉、蠶蛹粉、麥麩、豆餅粉；

（2）發酵培養：液體發酵培養基以2～25%體積比接種量接入種子液，在氣升式發酵罐中進行發酵，罐壓0.02~0.07Mpa，發酵罐通氣量為1:0.2V/V.min~1:3V/V.min，培養溫度15～25℃，培養時間3~30天；所述液體發酵培養基組成同液體種子培養基；

（3）菌絲體超微粉碎處理：發酵液離心后，所得菌絲體進行真空冷凍干燥，再放入超微粉碎機中于5~30℃下進行低溫粉碎2~20min，得到菌絲體超微粉；

（4）發酵菌絲體仿生提取：菌絲體超微粉加入至10~50倍質量的水中，加入足量酶1，調pH值為1.0~3.0，35~37℃、40~300rpmrpm下攪拌提取20min~150min，離心，得上清液1，取沉淀加入至10~50倍質量的水，加入足量酶2，調pH值為8.0~10.0，35~37℃、50~250rpmrpm下攪拌提取10min~120min，離心，得上清液2；合并上清液1和上清液2，調pH值為中性，即得冬蟲夏草發酵菌絲體活性組分；

所述酶1為下酶中的一種或多種：①胃蛋白酶、②木瓜蛋白酶、③α-淀粉酶、④凝乳酶；

所述酶2為下列中的一種或多種：①腸肽酶、②胰蛋白酶、③凝乳酶、④堿性蛋白酶。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶1為胃蛋白酶，或者為胃蛋白酶與木瓜蛋白酶、α-淀粉酶或凝乳酶的混合物，胃蛋白酶用量為2000~10000U/g菌絲體超微粉，木瓜蛋白酶用量為1000~5000U/g菌絲體超微粉，α-淀粉酶用量為1000~3000U/g菌絲體超微粉，凝乳酶用量為50~200U/g菌絲體超微粉。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶2為腸肽酶與胰蛋白酶、凝乳酶、堿性蛋白酶中一種或多種的混合物；腸肽酶用量為1~20U/g菌絲體超微粉，胰蛋白酶用量為100~500U/g菌絲體超微粉，凝乳酶用量為200~500U/g菌絲體超微粉，堿性蛋白酶用量為300~800U/g菌絲體超微粉。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述酶1為胃蛋白酶與凝乳酶的混合物，胃蛋白酶用量為5000~6000U/g菌絲體超微粉，凝乳酶用量為80~100U/g菌絲體超微粉；所述酶2為腸肽酶與胰蛋白酶的混合物，腸肽酶用量為5~10U/g菌絲體超微粉，胰蛋白酶用量為300~500U/g菌絲體超微粉。