[發明專利]具有抑菌活性的銀杏葉類脂成分的制備方法

有效

• 申請號: 201310044569.3
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103083368A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 王成章;陶冉
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林產化學工業研究所
• 主分類號: A61K36/16
• 分類號: A61K36/16;A61P31/04;A61P31/10;C07C33/03;C07C33/02;C07C29/76;C07C29/78;C07J9/00;C07J17/00;A61K127/00
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1.具有抑菌活性的銀杏葉類脂成分的制備方法，其特征包括銀杏葉類脂總不皂化物、類脂結晶物、類脂輕餾分和類脂重餾分以及化合物1～8(依次為異植物醇、橙花叔醇、芳樟醇、β-谷甾醇乙酸酯、β-谷甾醇、豆甾醇、麥角甾醇、胡蘿卜苷)和聚戊烯醇類脂成分的制備及抑菌活性。

2.根據權利要求1所述具有抑菌活性的銀杏葉類脂成分的制備方法，其特征在于化合物1～8制備方法包括下幾個步驟：

第一步，銀杏葉類脂軟膏的制備：取干燥粉碎銀杏葉粉(直徑0.25～5毫米以下)，加入溶劑A1，銀杏葉粉與溶劑質量比為1∶5～50；30～75℃加熱回流提取，時間2～8h，重復3次或以上提取；合并提取液，回收溶劑，得銀杏葉脂溶性成分軟膏；加1～15％溶液B1，軟膏與溶劑比1∶2～15(kg∶L)，采用30～75℃熱回流攪拌，攪拌速度為20～200r/min，時間0.5～5h，得到皂化液；加入溶劑C1，皂化液與溶劑比1∶2～10(V/V)，合并提取液，回收溶劑，從而得到銀杏葉類脂總不皂化物。

第二步，銀杏葉類脂成分的分子蒸餾分離方法：取銀杏葉類脂總不皂化物，放于0～-40℃下冷凍結晶1～5h，取出后迅速抽濾，得到結晶物；濾過的油狀物通過刮膜式分子蒸餾裝置分離，刮膜轉速100～300r/min，蒸餾溫度120～250℃，在高真空條件下(真空度大于等于1.0×10⁵)，輕組分以氣體狀態徑直飛向中間冷凝器并凝結成液體，進入輕餾分收集器，得到輕餾分；重組分沿筒體內壁進入重餾分收集器，得到重餾分。

第三步，銀杏葉類脂成分的色譜分離方法：將第二步中所得的結晶物與填料A按質量比1∶1充分混合磨細，上填料A柱，用洗脫劑三氯甲烷/甲醇體系洗脫，收集的餾分用薄層色譜碘蒸氣顯色跟蹤；100％三氯甲烷餾分，揮干溶劑后用溶劑B在5～-20℃下，重結晶得到化合物4(β-谷甾醇乙酸酯)；餾分三氯甲烷/甲醇(99％∶1％，V/V)，揮干溶劑后上C色譜柱，用洗脫劑三氯甲烷/甲醇體系洗脫，揮干溶劑后用溶劑D在0～-20℃下，重結晶得到化合物5(β-谷甾醇)，剩余物揮干溶劑后用溶劑E在5～-10℃下，重結晶得到化合物6(豆甾醇)，剩余物揮干溶劑后用溶劑F在0～-20℃下，重結晶得到化合物7(麥角甾醇)；三氯甲烷/甲醇(90％∶10％，V/V)餾分，揮干溶劑后用溶劑G在0～-20℃下，重結晶得到化合物8(胡蘿卜苷)；第二步中所得的輕餾分與填料A按質量比1∶1充分混合磨細，上填料A柱(粒徑0.04～0.1mm)，用洗脫劑石油醚/乙酸乙酯體系洗脫，收集的餾分用薄層色譜碘蒸氣顯色跟蹤；石油醚/乙酸乙酯(95％∶5％，V/V)餾分，揮干溶劑后用填料H薄層制備板制備，Rf值在I處，得到化合物1(異植物醇)；石油醚/乙酸乙酯(92％∶8％，V/V)餾分，揮干溶劑后上C色譜柱，得到化合物2(橙花叔醇)；石油醚/乙酸乙酯(90％∶10％，V/V)餾分，揮干溶劑后用填料H薄層制備板制備，Rf值在J處，得到化合物3(芳樟醇)；將第二步中所得的重餾分與填料A按質量比1∶1充分混合磨細，上填料A柱，用洗脫劑石油醚/乙酸乙酯體系洗脫，收集的餾分用薄層色譜碘蒸氣顯色跟蹤，取石油醚/乙酸乙酯(99％～97％∶1～3％，V/V)餾分，揮干溶劑后加入質量比為1∶5～15溶劑K，室溫攪拌溶解；然后將其與吸附劑L，按固液質量比為1∶10～100混合，在-40℃～30℃攪拌4～20小時，1000～10000轉/分鐘離心后過濾，上清液回收溶劑后即為純化后的聚戊烯醇類脂。

3.根據權利要求2所述具有抑菌活性的銀杏葉類脂成分的制備方法，其特征在于第一步中溶劑A1為丙酮或石油醚(60～90℃)或乙酸乙酯或無水乙醇；溶液B1為NaOH或KOH的甲醇或乙醇溶液；溶劑C1為丙酮或石油醚(60～90℃)或乙酸乙酯。

4.根據權利要求2所述具有抑菌活性的銀杏葉類脂成分的制備方法，其特征在于第三步中填料A為硅膠G，溶劑B為異丙醇或無水乙醇或乙腈；C色譜柱為Sephadex?LH-20填料；溶劑D為環己酮或丙酮；溶劑E為正戊醇或正丁醇；溶劑F為乙醚或正己烷；溶劑G為三氯甲烷或無水乙醇；填料H為熒光(GF₂₅₄)硅膠；Rf值I處在0.50～0.65；Rf值J處在0.40～0.55；溶劑K為丙酮或乙酸乙酯；吸附劑L為質量比1∶1～5混合的活性炭與硅藻土。