[發(fā)明專利]一種魚類NK-lysin效應(yīng)因子及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310044565.5
• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103145822A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張敏;孫黎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/70;A61K38/17;A61K48/00;A61P31/04;A61P31/12
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 周秀梅;李穎

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體的說是一種魚類NK-lysin效應(yīng)因子及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic?T?lymphocytes，CTLs)和自然殺傷細(xì)胞（natural?killer?cell，NKC)是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞。這些細(xì)胞在受到刺激時分泌一系列引起靶細(xì)胞凋亡和殺傷的效應(yīng)因子，其中一種即為NK-lysin。NK-lysin是saposin家族的一員，具有典型的saposin結(jié)構(gòu)域。

在哺乳動物中，NK-lysin是一種抗菌肽，具有廣譜的抑菌活性。因此，

NK-lysin在細(xì)菌性疾病的防治中有良好的應(yīng)用前景。NK-lysin目前只在五種硬骨魚中發(fā)現(xiàn)，但其功能、應(yīng)用等尚待研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種NK-lysin效應(yīng)因子及其應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種魚類NK-lysin效應(yīng)因子，NK-lysin為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。

NK-l?ysin效應(yīng)因子的制備方法，

以半滑舌鰨cDNA為模板，用引物F1和R1進行PCR擴增，PCR產(chǎn)物純化后與質(zhì)粒pIRES2-EGFP用T4DNA連接酶連接，連接液轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，篩選轉(zhuǎn)化子提取質(zhì)粒，即為含SEQ?ID?No.1中氨基酸序列所示的質(zhì)粒pCNK1；所述F1為5’-GATATCATGAACAAATCTCCAATCC-3’；R1為5’-GATATCGTTGTTTGGATAGAAGAGGA-3’。

NK-lysin效應(yīng)因子的應(yīng)用，所述NK-lysin效應(yīng)因子用于制備抗細(xì)菌或病毒的藥物。將含SEQ?ID?No.1中氨基酸序列所示的質(zhì)粒pCNK1在PBS中稀釋至200ug/ml。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點：本發(fā)明的NK-lys?in表達質(zhì)粒注射魚類后能夠明顯提高魚類的抗病毒和抗細(xì)菌感染能力。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。實施例旨在對本發(fā)明進行舉例描述，而非以任何形式對本發(fā)明進行限制。

在本發(fā)明實施例中所涉及到的常規(guī)性實驗方法均采用如下方法：

1.質(zhì)粒提取、DNA(PCR)產(chǎn)物純化、DNA片段從凝膠中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相應(yīng)試劑盒。

2.大腸桿菌用Hanahan方法（Sambrook?and?Russell:Molecular?Cloning:A?Laboratory?Mannual.Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press?2001）。

3.所有限制性內(nèi)切酶和連接酶皆購自于“紐英倫生物技術(shù)有限公司”，北京。

實施例1

本發(fā)明的NK-lysin為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列。

序列表SEQ?ID?No.1為：

MNKSPILLFCILAACSVWSVHGKSQEMNIDDEEPAEVELPVEAKPPGLCWGCKWALNKVKKAMTQKETYEKVKAR?LIKICNKIGFLKSRCHKFVITHLDELVEELSTTDDVKTICVNVKACNPKEPSHLLFYPNN

（a）序列特征：

●長度：135（有效作用區(qū)域47－121）

●類型：氨基酸序列

●鏈型：單鏈

●拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)：線性

（b）分子類型：蛋白質(zhì)

（c）假設(shè)：否

（d）反義：否

（e）最初來源：半滑舌鰨

結(jié)構(gòu)特點：該蛋白預(yù)期含有一個Saposin?B功能域（氨基酸47－121）。

實施例2

NK-lysin表達質(zhì)粒pCNK1的構(gòu)建：