[發明專利]一種生物堿及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310044533.5
• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103113376A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 章華偉;應晨;湯逸飛
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C07D487/22
• 分類號: C07D487/22;C12N1/14;C12P17/18;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/68
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種式（Ⅰ）所示生物堿，

2.一種用于權利要求1所述生物堿提取的煙曲霉SPS-02，其特征在于所述煙曲霉（Aspergillusfumigatus）SPS-02保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國武漢武漢大學，保藏日期為2013年1月13日，保藏編號為CCTCCNO:M2013014。

3.一種如權利要求1所述生物堿的制備方法，其特征在于所述方法為：將保藏編號為CCTCC?NO:M2013014即煙曲霉SPS-02發酵培養獲得的培養液過濾或離心，取濾液或上清液用乙酸乙酯在室溫下進行萃取，取有機層低溫真空濃縮，獲得浸膏F，將浸膏F進行分離純化，獲得所述生物堿；所述浸膏F分離純化方法為：（1）將浸膏F進行硅膠柱層析，用10~15倍柱體積的氯仿進行洗脫，收集洗脫液，低溫真空濃縮，獲得浸膏F1；（2）將浸膏F1進行硅膠柱層析，用3~5倍柱體積的氯仿進行洗脫，合并所有洗脫液，低溫真空濃縮，獲得浸膏F2；（3）利用葡聚糖凝膠Sephadex?LH-20對浸膏F2進行柱層析，洗脫劑為體積比1:1的氯仿和甲醇混合液，TLC跟蹤檢測含有藍色熒光點的部分，收集該部分洗脫液，合并洗脫液后低溫真空除去洗脫劑，得到浸膏F3；（4）浸膏F3采用反相高效液相色譜分離，流動相為體積比1:1.5的雙蒸水和甲醇混合液，收集保留時間11min時的洗脫液，低溫真空除去流動相得到式（Ⅰ）所示的生物堿。

4.如權利要求3所述生物堿的制備方法，其特征在于所述培養液的制備方法為：（1）斜面培養：將煙曲霉SPS-02接種至斜面培養基，28~30℃培養7~10天，獲得菌體斜面；所述斜面培養基終濃度組成為：馬鈴薯20g/L、瓊脂20g/L，溶劑為水，自然pH值；（2）種子培養：從菌體斜面挑取一接種環菌體接種至PD培養基，在100~150rpm、28~30℃條件下搖床培養3天，獲得種子液；所述PD培養基終濃度組成為：土豆200g/L、葡萄糖20g/L，溶劑為水，自然pH值；（3）發酵培養：將步驟（2）獲得的種子液以體積比1:10的接種量接種至發酵培養基，在140rpm、28℃條件下搖床培養15天，獲得發酵培養液；所述發酵培養基終濃度組成為：蔗糖30g/L，NaNO₃3g/L，K₂HPO₄1g/L，酵母膏1g/L，KCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，FeSO₄·7H₂O0.01g/L，溶劑為水，自然pH值。

5.一種權利要求1所述生物堿在制備腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑中的應用。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述的應用為：所述生物堿在制備白血病阿霉素耐藥細胞、人肺腺癌順鉑耐藥細胞或人卵巢癌順鉑耐藥細胞耐藥性逆轉劑中的應用。

7.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述生物堿在腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑中的濃度為5~10μM。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于所述生物堿在腫瘤細胞多藥耐藥性逆轉劑中的濃度為5μM。