[發(fā)明專利]毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310044436.6
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103091385A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 申剛義;于婉婷;張愛芹;崔箭;曾鳴;烏日圖
• 申請（專利權(quán)）人: 中央民族大學(xué)
• 主分類號: G01N27/453
• 分類號: G01N27/453
• 代理公司: 北京五月天專利商標(biāo)代理有限公司 11294
• 代理人: 涂蕭愷

1.一種毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器，其特征在于：包括至少一根毛細(xì)管以及在單一毛細(xì)管樣品進(jìn)口端內(nèi)壁依序分段排列具有能與底物相互作用的酶陣列，所述的毛細(xì)管為石英毛細(xì)管，內(nèi)徑為25-220um；所述的酶陣列分段集成3-10種類型的酶。

2.根據(jù)權(quán)利1所述的毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器，其特征在于：所述的酶通過共價鍵結(jié)合固定于毛細(xì)管而形成；不同酶固定在毛細(xì)管中的不同位置。

3.權(quán)利要求1或2的毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器，其特征在于：所述的酶陣列的總長度占毛細(xì)管的總長度為8-12%。

4.權(quán)利要求1-3任意一項所述的毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器的制備方法，其特征在于毛細(xì)管的一端內(nèi)壁進(jìn)行氨基化衍生，然后通過調(diào)節(jié)不同酶的進(jìn)樣壓力和時間，以控制酶的固定位置從而形成陣列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：首先對毛細(xì)管內(nèi)壁用0.1-1mol/L的鹽酸預(yù)處理10-30min，再用去離子水沖洗5-10min；接著利用毛細(xì)管電泳壓力從樣品進(jìn)口端注入一段30-60mm的濃度為10%的3-氨丙基三甲氧基硅烷乙醇溶液，反應(yīng)鍵合60-240min；反向通入空氣去除未鍵合于毛細(xì)管內(nèi)壁的硅烷化試劑后將毛細(xì)管進(jìn)口端與出口端分別置于去離子水中3-10min進(jìn)行清洗；然后壓力進(jìn)樣注入第一段濃度為4-8u/ml的固定酶溶液，長度為5-15mm，接著正向注入空氣將酶推入到距離進(jìn)樣口較遠(yuǎn)一端與3-氨丙基三甲氧基硅烷孵化反應(yīng)10-20min；反向通入空氣推出后多余的酶溶液并清洗毛細(xì)管進(jìn)口端；重復(fù)以上固定步驟，將其它酶依次注入到毛細(xì)管內(nèi)形成單獨區(qū)段的酶陣列；酶陣列孵化60min以上后反向通入空氣去除未鍵合的酶；最后將毛細(xì)管進(jìn)口端與出口端分別置于去離子水中3-10min進(jìn)行清洗并采用pH為7.5-9.5、濃度為50-200mmol/L的緩沖液沖洗1-10min。

6.權(quán)利要求1-3任意一項所述的毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器在檢測酶與底物相互作用中的應(yīng)用，其特征在于：基于毛細(xì)管電泳技術(shù)和液相色譜技術(shù)同時實現(xiàn)多種酶與底物的相互作用的檢測。

7.權(quán)利要求1-3任意一項所述的毛細(xì)管酶陣列微反應(yīng)器在同時應(yīng)用于多種酶抑制劑的高通量篩選中的應(yīng)用，其特征在于：基于毛細(xì)管電泳技術(shù)和液相色譜技術(shù)相結(jié)合進(jìn)行篩選。