[發(fā)明專利]CA19-9定量檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310043713.1
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103175970A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設計）人: 吳玉水;戴志文;蔡祥霞;謝玉玲
• 申請（專利權）人: 福建省洪誠生物藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及生物物質檢測分析領域，特別涉及一種CA19-9定量檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

在過去二三十年以來，惡性腫瘤發(fā)病率一直呈上升的趨勢，每年以3％至5％的速度增加，成為人類死亡的重要原因。以2002年為例，當年全世界新發(fā)腫瘤是1100萬例，死亡病例達到700萬，治愈和帶瘤生存達2500萬。腫瘤的早期診斷和治療對提高治愈率、改善生活質量和延長生存期至關重要。腫瘤標志物的血清含量水平一般與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、消退、復發(fā)等有良好的相關性，檢測這些腫瘤標志物的血清水平，對相關惡性腫瘤的早期診斷、治療效果和預后轉歸判斷等有重要參考價值，目前已在臨床廣泛應用。

腫瘤標志物是指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身合成、釋放或者由機體對腫瘤細胞反應而產生的一類物質。1978年由Herberman在美國召開的人類免疫與腫瘤免疫診斷會上提出，次年在英國第7屆腫瘤發(fā)生生物學和醫(yī)學會議被確認并開始引用。糖類抗原CA19-9是一種重要的腫瘤標志物之一。CA19-9是一種粘蛋白型的糖類蛋白腫瘤標志物，為細胞膜上的糖脂質，因由鼠單克隆抗體116NS19-9識別而命名。CA19-9是迄今報道的對胰腺癌敏感性最高的標志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在，分布于正常胎兒胰腺、膽囊、肝、腸和正常成年人胰腺、膽管上皮等處，是存在于血液循環(huán)的胃腸道腫瘤相關抗原。大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明顯增高。如果以正常參考范圍上限(37U/mL)為診斷標準，敏感性和特異性均可達90％以上。CA19-9水平與腫瘤的階段有關，血清中含量的高低提示手術的難易程度。術前CA19-9水平對預后有一定提示作用，低者預后較好，術后CA19-9水平降至正常者生存期長于未下降者。腫瘤復發(fā)時，CA19-9可再度升高，并且發(fā)生于影像學診斷之前。因此，CA19-9水平還可用作監(jiān)測腫瘤的復發(fā)。

目前發(fā)現(xiàn)的用于腫瘤篩查診斷的標志物大都在患者體內含量很低，一般的檢測方法不夠敏感，難于精確定量測定。因此，敏感、準確、簡便、快速的腫瘤標志物檢測方法具有十分重要的臨床應用價值。

發(fā)明內容

本發(fā)明實施例提供一種CA19-9定量檢測試劑盒及其制備方法，用于解決現(xiàn)有技術中無法實現(xiàn)定量測定微量標志物的技術問題。

本發(fā)明提供的一種CA19-9定量檢測試劑盒，包括：多個濃度不同的CA19-9校準品，CA19-9抗體包被的微孔板，CA19-9抗體的酶標記物，發(fā)光底物液和濃縮洗滌液。

其中，多個CA19-9校準品為6個，濃度為0U/mL、5U/mL、30U/mL、100U/mL、200U/mL和400U/mL。包被微孔板的包被濃度為5μg/mL。CA19-9抗體的酶標記物為采用戊二醛二步法標記的辣根過氧化物酶標記CA19-9抗體，稀釋倍數(shù)為1∶2000。發(fā)光底物液為魯米諾發(fā)光底物液，魯米諾發(fā)光底物液包括底物A液和底物B液，其中底物A液包括1.8g/L的魯米諾和0.2g/L的對碘苯酚，底物B液包括0.5g/L的過氧化脲。

本發(fā)明還提供一種CA19-9定量檢測試劑盒的制備方法，包括：制備多個濃度不同的CA19-9校準品；制備CA19-9抗體包被的微孔板；制備CA19-9抗體的酶標記物；制備化學發(fā)光底物液；以及制備濃縮洗滌液。

其中，制備多個濃度不同的CA19-9校準品包括：通過稀釋配制6個校準品，濃度為0U/mL、5U/mL、30U/mL、100U/mL、200U/mL和400U/mL。

制備CA19-9抗體包被的微孔板包括：將濃度為5μg/mLCA19-9抗體加入微孔板，置于4℃冰箱24小時；去除微孔板中的包被液后加入封閉液，置于4℃冰箱封閉24小時；去除微孔板中的封閉液后，置于37℃孵育箱8小時烘干。

制備CA19-9抗體的酶標記物包括：通過戊二醛二步法制得辣根過氧化物酶標記的辣根過氧化物酶標記CA19-9抗體，稀釋倍數(shù)為1∶2000。

化學發(fā)光底物液為魯米諾化學發(fā)光底物液，魯米諾化學發(fā)光底物液包括底物A液和底物B液；底物A液用0.05M?pH8.6的Tris-HCl緩沖液溶解魯米諾和對碘苯酚制得，其中魯米諾濃度為1.8g/L，對碘苯酚濃度為0.2g/L；底物B液用0.05M?pH8.6的Tris-HCl緩沖液稀釋過氧化脲制得，其中過氧化脲的濃度為0.5g/L。

本發(fā)明通過采用多個校準品和增強型發(fā)光體系，具有靈敏度高，線性范圍寬，光信號持續(xù)時間長，分析簡便快速，結果穩(wěn)定，誤差小，安全性好，使用期長的有益效果。