[發明專利]一種人參PDR跨膜轉運蛋白基因啟動子及其應用

無效

• 申請號: 201310043666.0
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103103193A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 羅志勇;張儒;曹宏哲;黃景嘉;陳湘暉;楊芳
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/84;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 中南大學專利中心 43200
• 代理人: 胡燕瑜

1.一種人參PDR跨膜轉運蛋白基因啟動子，其特征在于：所述啟動子序列如SEQ?ID?NO.1所示，或是與SEQ?ID?NO.1具有99%以上同源性的DNA序列。

2.根據權利要求1所述的啟動子，其特征在于：所述啟動子包括ERE元件、TCA元件、TGACG-Motif和W-Box。

3.如權利要求1或2所述的啟動子的制備方法，其特征在于依次為下列步驟：（1）提取人參根基因組總DNA，以人參根總DNA為模板，構建四個啟動子文庫：Dra?I文庫、EcoR?V文庫、Pvu?II文庫和Stu?I文庫；（2）分別以構建的Dra?I文庫、EcoR?V文庫、Pvu?II文庫和Stu?I文庫為模板，根據人參PgPDR2基因的5′端序列設計引物，進行PCR擴增；（3）膠回收PCR產物，該產物即得本發明所述的ProPDR2啟動子。

4.根據權利要求3所述的啟動子的制備方法，其特征在于：所述根據人參PgPDR2基因的5′端序列設計的引物包括外側引物Pro3-SP和巢式引物Pro3-Nest-SP，外側引物Pro3-SP如SEQ?ID?NO.2所示，巢式引物Pro3-Nest-SP如SEQ?ID?NO.3所示。

5.含有權利要求1或2所述的啟動子的重組載體，其特征在于：所述重組載體為pBI121-ProPDR2::GUS，所述空載體為pBI121載體，在ProPDR2啟動子的下游連接GUS報告基因。

6.如權利要求5所述的重組載體的構建方法，其特征在于依次為下述步驟：（1）根據啟動子序列設計片段相對應的包含Hind?III/Bam?HI酶切位點的特異性引物，分別用Bam?HI和Nco?I雙酶切pBI121和啟動子ProPDR2，回收pBI121載體和ProPDR2啟動子片段；（2）將pBI121和ProPDR2兩片段連接并轉化DH5α；（3）通過卡那霉素篩選、PCR和Bam?HI/Nco?I雙酶切鑒定，即獲得所述重組載體pBI121-ProPDR2::GUS。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：在所述步驟（1）中根據啟動子序列設計片段相對應的包含Hind?III/Bam?HI酶切位點的特異性引物如SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示。

8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于：步驟（3）中PCR鑒定的引物對如SEQ?ID?NO.6和SEQ?ID?NO.7所示。

9.根據權利要求1或2所述的啟動子ProPDR2在調控人參皂苷轉運積累和人參育種中的應用。

10.根據權利要求5所述的的重組載體pBI121-ProPDR2::GUS在調控人參皂苷轉運積累中和人參育種中的應用。