[發明專利]一種熒光檢測二價銅離子的方法

有效

• 申請號: 201310042739.4
• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103163108A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 陰彩霞;霍方俊
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

技術領域：

本發明涉及二價銅離子的檢測分析技術，具體屬于一種基于1,8-二氨基萘（DAN）熒光定量檢測Cu²⁺的方法。

背景技術：

作為酶的輔因子，信號使者，銅在生物體系中扮演著許多重要的角色。但高濃度的游離的二價銅離子會產生有害的效應，包括氧化損傷或引起蛋白質錯誤折疊致使許多神經變性疾病，神經性病變包括門克斯和威爾遜疾病、阿爾茨海默氏癥、肌萎縮性側索硬化癥、朊毒體病。尤其是，在高濃度的二價銅離子存在下，由于在酶催化反應中銅離子取代其他金屬離子作為輔因子，短期接觸能引起胃腸紊亂；長期接觸，會引起肝或腎不適。監測生理過程中二價銅離子的濃度和亞細胞分布的生理過程中銅的濃度，大大有助于理解它的化合物生理功能和致病原理。同時，銅離子已經被認定為一種環境污染物，并引起人們的關注。準確檢測二價銅離子，在環境和生物分析等領域有重要意義。而發展高選擇性、高靈敏度的二價銅離子的檢測方法仍是一個挑戰性的任務。

發明內容：

本發明的目的是提供一種低成本、高靈敏、高選擇性、在水相中熒光檢測二價銅離子的方法。

本發明將商業可得的1,8-二氨基萘作為熒光試劑，在檢測二價銅離子中應用。1,8-二氨基萘的結構式為：

本發明提供的一種檢測二價銅離子的方法，步驟為：

（1）、配制pH=7.0、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的DAN乙醇溶液；

（2）、按體積比2000:1將HEPES緩沖溶液和DAN乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入,435nm的熒光強度逐漸減弱；

（3）、用蒸餾水配制2mM的Cu²⁺溶液，把2mL的HEPES緩沖溶液和1μL的DAN乙醇溶液加到熒光比色皿中，逐漸加入Cu²⁺溶液的體積為0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5uL，同時在熒光光譜儀上測定435nm的對應的熒光強度F為529、490、469、422、400、373、335、305、236，以Cu²⁺濃度為橫坐標，以相對熒光強度F₀-F(F₀﹦570)為縱坐標繪制圖，得到Cu²⁺濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F₀-F=10.9+64.0c(c的單位為10^-6mol/L)；

（4）、將HEPES緩沖溶液2000uL和1,8-二氨基萘乙醇溶液1uL加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取V?ul待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的熒光強度代入步驟（3）的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C_待測樣=2000uL×c×10^-6/VuL,即可求得Cu²⁺的濃度。

經實驗證明，其它金屬離子不干擾體系對Cu²⁺的測定。

與現有技術相比，本發明具有如下優點和效果：1、檢測體系成本低廉，試劑商業可得且廉價；2、本發明的檢測方法，對Cu²⁺顯示了高的靈敏性和選擇性；3、檢測過程在水相中進行；4、檢測手段簡單，只需要借熒光光譜儀；5、本發明可用于細胞成像。

附圖說明：

圖1實施例1DAN與Cu²⁺作用的熒光發射圖。

圖2實施例2DAN與各種陽離子作用的熒光柱狀圖及顏色對照圖。

圖3實施例3工作曲線圖。

圖4實施例4細胞成像圖。

具體實施方式：

實施例1

配制pH=7.0、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的DAN溶液；把2mL的HEPES緩沖溶液及1μL的DAN乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，取Cu²⁺的溶液，逐漸用微量進樣器加到此比色皿中，邊加樣邊在熒光分光光度儀上檢測，隨著Cu²⁺的加入，435nm處熒光強度逐漸減弱。熒光發射圖見圖1。

實施例2