[發明專利]一種熒光檢測次氯酸根的方法

無效

• 申請號: 201310042737.5
• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103149184A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 霍方俊;陰彩霞
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 山西五維專利事務所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

技術領域

本發明涉及次氯酸根檢測技術，具體屬于一種以分散紫26為熒光試劑，快速、定量熒光檢測次氯酸根的方法。

背景技術

NaOCl被廣泛用于漂白劑和消毒劑，其濃度范圍為10^-5～10^-2mol/L。但是，濃縮的次氯酸鹽溶液對人類和動物的健康有潛在的危害。另一方面，次氯酸根是一個重要的生物活性氧物種（ROS），它在免疫系統中起著關鍵的作用。生物體內的次氯酸根對生命體是必不可少的，具有重要的抗菌性能。然而，異常的次氯酸鹽濃度可以導致組織損傷和疾病，如肝缺血再灌注損傷，動脈粥樣硬化，肺損傷，類風濕心血管疾病，神經元變性，關節炎和癌癥。因此，靈敏的和高選擇性的用于次氯酸鹽檢測的探針是非常需要的。而檢測環境和生物樣品中的次氯酸根，如天然水和自來水也是生化研究的興趣所在。近年來，熒光探針備受關注。然而，大多數熒光探針一般涉及復雜和高成本的有機合成。因此，發展用商業可得、廉價的試劑，操作方便、選擇性高、靈敏度高的次氯酸根定量檢測方法尤為重要。

發明內容：

本發明的目的是為了克服現有技術次氯酸根檢測中存在的問題，提供一種體系廉價、操作方便、選擇性高、靈敏度高的熒光檢測次氯酸根的方法。

本發明將商業可得的分散紫26作為熒光試劑在檢測ClO^-中應用。分散紫26的結構式：

本發明提供的一種熒光檢測ClO^-的方法，步驟為：

（1）、配制pH=7.0、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26乙醇溶液；

（2）、按體積比400:7將HEPES緩沖溶液和分散紫26乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，隨著待測樣的加入，625nm的熒光強度逐漸減弱；

（3）、用蒸餾水配制2mM的ClO^-溶液，把2mL的HEPES緩沖溶液和35μL的分散紫26乙醇溶液加到熒光比色皿中，逐漸加入ClO^-溶液的體積為25、50、100、200、300、400、500、600uL，同時在熒光光譜儀上測定625nm的對應的熒光強度F為566、530、492、397、323、213、23，以ClO^-濃度為橫坐標，以相對熒光強度F₀-F(F₀﹦588)為縱坐標繪制圖，得到ClO^-濃度的工作曲線；線性回歸方程為：F₀-F=2.164+0.929c(c的單位為10^-6mol/L)；

（4）、將HEPES緩沖溶液2000uL和分散紫26乙醇溶液35uL加到干凈的熒光比色皿中，用微量進樣器吸取V?ul待測樣品溶液，加入到此干凈的熒光比色皿中，在熒光分光光度儀上檢測，將測得的熒光強度代入步驟（3）的線性回歸方程，得到濃度c，待測樣品C_待測樣=2000uL×c×10^-6/VuL，即可求得ClO^-的濃度。

經實驗證明，其它分析物不干擾體系對ClO^-的測定。

與現有技術相比，本發明具有如下優點和效果：1、檢測體系成本低廉，試劑商業可得且廉價；2、本發明的檢測方法，對ClO^-顯示了高的靈敏性和選擇性；3、檢測過程在水相中進行；4、檢測手段簡單，只需要借助熒光光譜儀即可實現。

附圖說明：

圖1實施例1分散紫26與ClO^-作用的熒光發射圖

圖2實施例2分散紫26與各種分析物的熒光柱狀圖

圖3實施例3工作曲線

圖4實施例4細胞成像圖

具體實施方式：

實施例1

配制pH=7.0、濃度為10mM的HEPES緩沖溶液，并用乙醇配制2mM的分散紫26溶液；把2mL的HEPES緩沖溶液及35μL的分散紫26乙醇溶液加到干凈的熒光比色皿中，取ClO^-的溶液，逐漸用微量進樣器加到此比色皿中，邊加樣邊在熒光分光光度儀上檢測，隨著ClO^-的加入，625nm處熒光強度逐漸減弱。熒光發射圖見圖1。

實施例2