[發(fā)明專利]雞新城疫、禽流感（H9亞型）、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310042471.4
• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103143010A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鮑海忠;鞠洪濤;宋曉飛;王蕾;徐龍濤;吳昊
• 申請（專利權(quán)）人: 齊魯動物保健品有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61P31/14;A61P31/16;A61P31/04
• 代理公司: 北京君智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11305
• 代理人: 鄭明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及雞新城疫、禽流感（H9亞型）、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗，屬于獸用生物制品領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

新城疫（Newcastle?disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle?disease?virus，NDV）引起的一種禽類急性、高度接觸性傳染病。臨床上新城疫常呈敗血癥經(jīng)過，主要特征是呼吸困難，下痢—排出綠色或黃色稀糞，神經(jīng)機(jī)能紊亂—出現(xiàn)陣發(fā)性痙攣、頭頸扭轉(zhuǎn)、角弓反張、運(yùn)動失調(diào)以及麻癥狀，粘膜和漿膜出血和壞死。該病發(fā)病急、致死率高，對養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展構(gòu)成嚴(yán)重的威脅，被國際獸醫(yī)局定為A類烈性傳染病，一直是影響世界養(yǎng)雞業(yè)的最主要疾病之一。?

禽大腸埃希氏菌病又稱禽大腸桿菌病（Avian?Colibacillosis），指部分或全部由大腸埃希氏菌（Escherichiacoli，E.coli）所引起的局部或全身性感染的疾病，可以引起胚胎死亡、臍炎、敗血癥、肉芽腫、卵黃性腹膜炎和全眼球炎（Calnek?BW主編，高福，蘇敬良主譯）.禽病學(xué).第10版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999，158-171）等一系列病征，是2至12周齡的雞和火雞的一種常見傳染病，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。大腸桿菌血清型極多，已知大腸桿菌有菌體（O）抗原173種，表面（K）抗原103種，鞭毛抗原60種。病原性大腸桿菌的許多血清型可引起多種動物發(fā)病。世界許多國家已經(jīng)做了詳細(xì)調(diào)查，確定最常與禽病有關(guān)的血清型是O1、O2、O36和O78，很少分離到其他血清型。國內(nèi)學(xué)者紹華斌、霍龍飛和劉瑞田等也得出過相同結(jié)論（李樹博.當(dāng)前禽大腸桿菌病的流行特點(diǎn)與防控措施.現(xiàn)代畜牧獸醫(yī).2011.12，39-40）。?

低致病性禽流感（Mildly?pathogenic?avian?influenzavirus，MPAIV）在實(shí)驗室條件下，受感染雞死亡率很低，但是和E.coli混合感染時，死亡率會有不同程度的提高，雞產(chǎn)蛋率銳減，肉雞增重減少（Swayne?D?E，Pathobiology?of?H5N2Mexican?avian?infiuenza?virus?infections?of?chickens.Vet?Pathel.1997，34(6):557-567）。其中，H9亞型禽流感病毒是導(dǎo)致低致病性禽流感發(fā)生、流行的諸多因素中較為重要的一種。?

隨著養(yǎng)雞業(yè)的快速發(fā)展和養(yǎng)殖環(huán)境的污染，近年來蛋雞疾病尤其是傳染病不斷增多和復(fù)雜化。雞群混合感染嚴(yán)重，發(fā)病率和死亡率都較高，給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中，?雞新城疫、低致病性禽流感和禽大腸埃希氏菌病三種疾病混合感染較為常見，損失也較為嚴(yán)重。這種背景下，研制一種可同時預(yù)防這三種疾病的疫苗顯得尤為重要。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是通過新城疫病毒La?Sota株、自行分離的一株H9亞型禽流感病毒株、自行分離的四株禽源大腸埃希氏菌菌株（血清型分別為：O1、O2、O78、O36），提供一種可同時預(yù)防雞新城疫、H9亞型禽流感和禽大腸埃希氏菌病三種疾病的疫苗，一次免疫即可預(yù)防三種疾病。?

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案在于：?

1.雞新城疫、禽流感(H9亞型)、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗含有雞新城疫病毒LaSota株病毒LaSota株、H9亞型禽流感病毒LG1株和禽源大腸埃希氏菌菌株血清型O1的QL1株、血清型O2的QL2株、血清型O36的QL36株、血清型O78的QL78株，以上菌株已與2013年01月31日送交北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號：QL1株為CGMCC?No.7241，QL2株為CGMCC?No.7242，QL36株為CGMCC?No.7243和QL78株為CGMCC?No.7244。?

2.本發(fā)明所述的雞新城疫、禽流感（H9亞型）、大腸埃希氏菌病三聯(lián)滅活疫苗的制備方法：?

（1）分別按常規(guī)方法用雞胚繁殖雞新城疫病毒、H9亞型禽流感病毒制備成滅活并經(jīng)濃縮的病毒液；用含0.1%微量鹽溶液的馬丁肉湯分別培養(yǎng)四型禽源大腸埃希氏菌菌株制備成滅活并經(jīng)濃縮的菌液，再按3:3:2:2的體積比例混合；?

（3）將以上制備的滅活并經(jīng)濃縮的雞新城疫病毒液、H9亞型禽流感病毒液與四型禽源大腸埃希氏菌滅活濃縮混合菌液按1:1:1體積比混合后制備成水相，再按常規(guī)方法制備滅活佐劑疫苗。?