[發明專利]尼克酰胺磷酸核糖轉移酶在制備神經保護藥物中的用途

在審

• 申請號: 201310041957.6
• 申請日: 2013-02-03
• 公開（公告）號: CN103961691A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 高艷琴;曹國棟;邢娟;景崝;陳俊
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K38/45
• 分類號: A61K38/45;A61P9/10;A61P25/28
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域：

本發明屬制藥領域，涉及尼克酰胺磷酸核糖轉移酶（NAMPT）的新的醫藥用途。具體涉及NAMPT尼克酰胺磷酸核糖轉移酶在制備神經保護及康復藥物中的用途。尤其是在制備治療中樞神經系統疾病藥物中的用途。

背景技術

2012年中國衛生部組辦的中國卒中大會指出：中風尤其是缺血性腦中風已經成為我國發病率最高的疾病。而迄今為止，臨床上唯一有效的治療藥物就是溶栓治療（tPA），但實踐顯示tPA的應用非常有限，其原因是tPA有嚴格的治療窗口，只有在中風后3小時內靜脈注射才有效。因此，臨床上只有不到3%的病人能被施于tPA治療。因此，開發具有神經保護和神經功能恢復的有效藥物是治療缺血性腦中風的當務之急。目前，采用提高血管再生和神經再生以獲得神經功能恢復的治療方法在中風治療研究領域中得到關注，其原因是由于這些療法表現出很高的療效和延長治療時間窗。

尼克酰胺磷酸核糖轉移酶（Nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT）是NAD生物合成的限速酶，是ATP的主要來源。NAMPT在能量代謝中發揮了重要的作用，除了調節能量代謝，的研究還發現NAMPT具有如下功能：增加內皮細胞的增值，抑制凋亡，調節血管張力和促進自噬等。研究顯示，在哺乳動物中，NAMPT蛋白既在細胞內存在（iNAMPT）又在細胞外中存在（eNAMPT），其中，細胞內NAMPT作為NAD生物合成酶的作用已經被證明，而細胞外的NAMPT的功能迄今仍然未知。eNAMPT沒有分泌信號肽，但在一些細胞中還是能通過非經典的分泌機制進入細胞外空間或者血液比如脂肪細胞、肝細胞、巨噬細胞和白細胞。eNAMPT被報道可以作為細胞因子增強前體B細胞的增值，并且可以在急性慢性炎性疾病如敗血癥、急性肺損傷、心肌梗死、糖尿病和關節炎中以旁分泌的形式介導炎癥反應。但是，神經細胞是否外分泌eNAMPT以及eNAMPT在中樞神經系統中的作用尚未見報道。本申請的發明人之前的研究顯示eNAMPT出現在中樞神經系統中，進一步的研究發現iNAMPT并沒有發生變化，但是eNAMPT的表達在缺血后明顯的升高，暗示eNAMPT可能與腦保護作用相關。另外，研究還發現NAMPT重組蛋白可以通過血腦屏障并且顯著減小中風模型動物的梗死面積。因此，在大腦缺血的條件下，存在于細胞外的NAMPT是一種重要的神經保護分子，也暗示了NAMPT蛋白可能是一種新的可用于臨床治療腦缺血的治療策略。

雖然NAMPT作為NAD生物合成的重要調節因子，在基因敲除、轉基因及慢病毒介導的NAMPT過表達的動物中，其被證明具有腦保護作用，然而，由于轉基因技術無法用于臨床，而慢病毒用于中樞神經系統具有明顯的缺點，如只能作用于特定腦區，以及形成潛在的插入性突變。因此本發明的申請人擬提供NAMPT在治療中風藥物中的新用途。

發明內容：

本發明的目的是克服現有技術的缺陷，提供尼克酰胺磷酸核糖轉移酶（NAMPT）的新的醫藥用途。具體涉及NAMPT尼克酰胺磷酸核糖轉移酶在制備神經保護及康復藥物中的用途，尤其是在制備治療中樞神經系統疾病藥物中的用途。

本發明采用蛋白重組技術合成了NAMPT，對NAMPT對抗缺血性腦損傷的神經保護作用作了全面評估，同時對于NAMPT蛋白經外周給藥（靜脈注射或腹腔注射）可以通過血腦屏障以及可能涉及作用靶點作了試驗驗證，實驗結果為神經保護藥物的開發提供更多的理論依據和新的研究思路，可進一步用于臨床，為TBI治療提供一個新的藥物選擇。

本發明使用真核表達質粒表達NAMPT蛋白，并使用葉酸脫氫酶-甲氨蝶呤選擇系統，在CHO細胞系中進行NAMPT重組蛋白的合成，獲得NAMPT重組蛋白。