[發明專利]一種基于核酸適體修飾的納米通道分離β-雌二醇和雌酮的方法

有效

• 申請號: 201310041791.8
• 申請日: 2013-02-01
• 公開（公告）號: CN103130856A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 黃杉生;代國帥;李平;樊定艷
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: C07J1/00
• 分類號: C07J1/00
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 張美娟

技術領域

本發明涉及一種基于納米通道膜材料上的分子水平膜分離技術，具體是一種基于核酸適體修飾的納米通道分離β-雌二醇和雌酮的方法；材料領域和分離技術領域。

背景技術

在食用動物飼養和化妝品生產過程中存在濫用激素的現象，導致肉類、蛋類、乳制品類及化妝品中抗生素和激素殘留污染問題。大量文獻表明，這些激素類物質特別是雌激素類物質攝入人體可能導致與內分泌相關的腫瘤和生育缺陷，損害肝臟和腎臟，還會對嬰兒和青少年的生長發育造成嚴重影響；此外，激素具有特殊的美容功效而常被一些化妝品生產商非法添加到各類化妝品中，對廣大消費者的健康產生潛在威脅，因此雌激素嚴重威脅人類的健康的問題日漸成為人們關注的熱點。

為了遏制食品和化妝品中激素的污染，嚴格控制產品質量，確保使用安全，保障人民身心健康，迫切需要建立雌激素類物質分離分析新方法。目前用于激素類物質常涉及到的方法中有放射免疫法、酶聯免疫法、氣相色譜法和高效液相色譜法，利用這些方法對食品和化妝品中雌三醇、雌二醇、炔諾酮、雌酮、己烯雌酚、己二烯雌酚及己烷雌酚等多種雌激素的分離分析方法進行了研究，取得了較好的效果。但是，這些方法復雜、費時、儀器攜帶不方便，有些還需要對試樣衍生化處理，周期較長。特別是β-雌二醇（β-estradiol，雌甾-1，3，5（10）-三烯-3，17β-二醇，C₁₈H₂₄O₂）和雌酮（estrone，3-羥雌甾-1，3，5（10）-三烯-17-酮，C₁₈H₂₂O₂）這兩種天然雌激素，結構非常相似，很難實現二者分離，因此，發展準確、快速、靈敏和高效的分離檢測該類污染物的方法對國民健康和經濟發展具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于核酸適體修飾的納米通道分離β-雌二醇和雌酮的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種基于核酸適體修飾的納米通道分離β-雌二醇和雌酮的方法，其步驟如下：

1）金納米通道膜的制備：

采用化學沉積法在多孔聚碳酸酯(PC)膜上沉積金。將PC膜浸入無水甲醇中，超聲震蕩5min，以洗去基膜上吸附的雜質并將膜活化；然后將清洗后的PC膜浸入0.025mol/L?SnCl₂溶液45min，不斷輕微搖動溶液使Sn²⁺均勻地吸附在基膜及膜孔表面，取出用水漂洗2次；在N₂氣保護下將膜浸入0.029M?Ag(NH₃)₂⁺溶液中15min，取出用水洗4次，在甲醇中浸泡5～10min，浸入濃度為5～10mmol/L亞硫酸金鈉沉積溶液(pH=10)中；在1～4℃溫度下化學鍍金，5～6小時后取出用水洗4次，再用25％HNO₃浸12h除去未反應的Ag，即得到Au納米通道陣列。

2）金納米通道的修飾：

采用化學沉積的方法在50nm多孔聚碳酸酯膜上沉積金3h，得到功能化金納米通道陣列；將制備的功能化金納米通道膜浸入在1～3μmol/L核酸適體的pH=7.4、0.5mmol/L?Tris-HCl緩沖溶液中孵化24h，使納米通道修飾上核酸適體；然后用同濃度的緩沖溶液清洗修飾膜除去未鍵合的核酸適體分子，即可得到核酸適體功能化的納米通道膜；

3）納米通道膜的分離遷移：

將制備的核酸適體功能化的納米通道膜置于U形流通池中間，將U形流通池分隔為進樣池和擴散池，池中均有磁力攪拌器以相同速度攪拌，膜的有效透過面積為1.96cm²，進樣池和擴散池容積為5mL；將待分離溶液置于進樣池中，擴散池放置不含待分離物質的空白溶液（不含待分析物質的同濃度的Tris-HCl緩沖溶液）。

步驟2）中，所述功能化金納米通道陣列的孔徑約為20nm。

步驟2）中，所述的核酸適體是由25～80個堿基組成的能與蛋白質、多肽、金屬離子和小分子等特異性結合的寡聚核苷酸DNA或RNA鏈。

步驟3）中，核酸適體功能化的納米通道以″○″型密封圈進行密封。

本發明通過金硫鍵進行共價鍵單層自組裝。