[發明專利]一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發酵培養基及發酵培養方法

有效

• 申請號: 201310041566.4
• 申請日: 2013-02-01
• 公開（公告）號: CN103074289A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 李雪龍;雷健;吳楠;孟莉;尹柘
• 申請（專利權）人: 東北制藥(沈陽)科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/10
• 代理公司: 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙) 21229
• 代理人: 甄玉荃

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發酵培養基及發酵培養方法。

背景技術

發明專利92113318.9公開了一種地衣芽孢桿菌BL63516（保藏號：CGMCCNo.0183）制成的微生態制劑，即整腸生，可用于治療成人急性、慢性腹瀉及各種原因引起的腸道菌群失調癥。1992年開始先后有整腸生膠囊和整腸生顆粒劑產品經國家藥品監督管理局批準投放市場。經過20年的臨床應用實踐表明，整腸生具有較好的調整人體菌群失調的作用，市場、臨床應用均未發現毒副作用及不良反應方面的相關報道。該專利提供的制備地衣芽孢桿菌BL63516原菌粉的技術方案是：菌種經pH6.0-7.8的營養肉湯培養基，37℃培養15-24小時，制成種子液；擴大培養時使用pH6.0-7.8的營養瓊脂培養基，35-38℃培養48小時，制成菌苔液，離心獲得菌泥，再按1:8的重量比加入無水碳酸鈣，65-75℃脫水干燥制成原菌粉。

該技術出現在微生態制劑工業化的早期，菌泥產量低，生產周期長，工作量巨大。后經沈陽第一制藥廠1998年技術改造將固態發酵法升級為液態深層發酵法，工業化水平得到了大幅提升，但依然使用用于一般細菌增菌培養的通用培養基，即營養肉湯培養基（Nutrient?Broth），并未研發設計適合地衣芽孢桿菌BL63516專屬培養基。

發明專利201010578718.0在液態深層發酵法的基礎上，公開了地衣芽孢桿菌BL63516凍干菌種溫度梯度復蘇培養的方法。該專利提供的制備地衣芽孢桿菌BL63516原菌粉的技術方案是：菌種經pH7.0-7.4的營養肉湯培養基，恒溫培養2-8小時，制成種子液；發酵罐擴大培養時使用pH7.0-7.4的營養肉湯培養基，溫度37±1℃，罐壓0.02-0.04MPa，培養12-36小時，制成發酵液，離心獲得菌泥，再按1:3-7的比例加入無水碳酸鈣，60±2℃脫水干燥制成原菌粉。

雖然他們都是針對地衣芽孢桿菌BL63516進行了一系列研究，但以上的發酵工藝及培養基配方設計上，均依然采用用于一般細菌增菌培養的通用培養基，即營養肉湯培養基（Nutrient?Broth），都未研發設計適合地衣芽孢桿菌BL63516的專屬培養基，且對該菌種都是采用一次配料、滅菌、批次發酵的工藝，在發酵過程中只對發酵溫度和罐壓進行著本領域技術人員所公知的干預控制，所以目前地衣芽孢桿菌BL63516發酵產物中，活菌數含量低，芽孢形成率不高，這一問題一直沒有得到根本的解決。因此，研制開發一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發酵培養基及發酵培養方法一直是亟待解決的課題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發酵培養基及發酵培養方法，通過調整培養基中菌種生長所需的碳源、氮源和無機離子的比例，控制整個發酵過程中各時段的溫度、罐壓、溶氧、pH等全方位指標，提高了地衣芽孢桿菌BL63516的萌發和生長速度，提高地衣芽孢桿菌BL63516活菌數和芽孢形成率。

本發明的目的是這樣實現的：一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發酵培養基，包括牛肉粉或牛肉膏、蛋白胨、麥芽糊精、低聚半乳糖、NaCl和水，各組分質量百分比為：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.5%、蛋白胨0.5-2.0%、麥芽糊精0.1-0.5%、低聚半乳糖0.1-0.3%、NaCl0.1-2.0%，余量為水，用NaOH調節pH為：6.5-9；優選各組分質量百分比為：牛肉粉或牛肉膏1.0-2.0%、蛋白胨0.7-1.7%、麥芽糊精0.1-0.4%、低聚半乳糖0.11-0.2%、NaCl0.3-1.5%，余量為水，用NaOH調節pH為7.5-8.5；所述蛋白胨為牛蛋白胨、大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨、魚蛋白胨的一種或幾種；一種促進地衣芽孢桿菌BL63516生長的發酵培養基的發酵培養方法，該方法包括以下步驟，

（1）將地衣芽孢桿菌BL63516的種子液接種于發酵培養基中進行液體發酵培養；

（2）選擇種齡8-15小時的種子液進行接種，接種量為0.03-1.0%；