[發(fā)明專利]一種紅花藥材的指紋圖譜的鑒別方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310040436.9
• 申請日: 2013-02-02
• 公開（公告）號: CN103969381A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 果德安;吳婉瑩;趙丙賢;呂延英;劉蓉霞;姚帥;王俊平;趙興;蔡錄影;王丹丹;侯晉軍;笪娟
• 申請（專利權(quán)）人: 西安世紀盛康藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種紅花藥材指紋圖譜的鑒別方法，具體地說是用高效液相色譜指紋圖譜法來對紅花藥材的有效成分進行質(zhì)量控制的一種鑒別方法。

背景技術(shù)

紅花具有活血通徑、散瘀止痛的功效，為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。中國藥典2010版以羥基紅花黃色素A、山柰素(C₁₅H₁₀0₆) 為指標(biāo)進行含量測定；姚苗苗采用RP-HPLC法同時測定紅花中羥基紅花黃色素A與紅花黃色素A的含量（藥物分析雜志, 2010年 02期）。

中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。“整體性”和“模糊性”為其顯著特點。中國食品藥品監(jiān)督管理局于2000年頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）》，要求中藥注射劑必須進行指紋圖譜的研究，并建立其相關(guān)的標(biāo)準。規(guī)范了中藥指紋圖譜的研究，從而掀起了國內(nèi)近幾年來對指紋圖譜的研究熱潮。目前，對中藥材質(zhì)量控制較成熟的方法有單個成分含量測定或一類成分如總皂苷、總黃酮等的紫外分光光度測定法，不能對制劑進行全面直觀的質(zhì)量控制。采用指紋圖譜技術(shù)除了能反映幾乎全部成分的含量、種類外，尚能反映成分的比例、未知成分（含量測定方法中可能已被作為無效或干擾成分扣除）的產(chǎn)生，更多的是從藥物穩(wěn)定性、安全性上進行監(jiān)測。《中國藥典》2010年版，采用薄層色譜法對紅花進行鑒別，由于薄層色譜鑒別法本身受溫度、濕度、薄層板厚度以及載樣量等諸多因素影響，存在樣品的化學(xué)成分體現(xiàn)不完全，可鑒別的成分數(shù)量較少，同一樣品的重現(xiàn)性不佳的缺點。而已有文獻報道的紅花指紋圖譜技術(shù)，圖譜中體現(xiàn)的化學(xué)成分較少，提供的信息量小，不能很好地代表紅花藥材的整體質(zhì)量，不能對紅花藥材的質(zhì)量進行有效的鑒別。而采用本發(fā)明方法則可充分展示紅花藥材的化學(xué)成分的指紋圖譜，信息量豐富，方法重現(xiàn)性良好，可有效鑒別紅花藥材的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種紅花藥材的指紋圖譜鑒別方法，通過指紋圖譜測定對紅花藥材進行全面而有效的鑒別。

本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的。

本發(fā)明紅花藥材的指紋圖譜鑒別方法，該方法包括如下步驟：

(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇、乙腈甲醇混合溶劑為流動相A，以甲酸水溶液或冰醋酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液為流動相B。檢測器為紫外檢測器、示差檢測器或蒸發(fā)光檢測器；

(b)供試品溶液的制備取紅花藥材粉末（過篩），精密稱定，加水浸泡，加熱回流，提取液濾過，濾液濃縮，加入乙醇，靜置一夜。吸取上清液，熱空氣吹干，加水溶解，濾過，取續(xù)濾液，備用。

(c)測定法 吸取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得。

進一步優(yōu)選的測定條件為：

(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(柱長10~25cm，內(nèi)徑3~5cm，粒徑為1~10μm)；以乙腈為流動相A，以0.01~2%冰醋酸水溶液為流動相B；紫外檢測器，檢測波長200~400nm；柱溫20~50℃，流速為每分鐘0.2~2ml。

(b)供試品溶液的制備：取紅花藥材粉末（過30~50目篩）1.50~4.00g，精密稱定，加水40~60ml，浸泡20~40分鐘，加熱回流1~3小時，提取液濾過，濾液濃縮至10~20ml，加入80%~95%乙醇30~50ml，2~5℃靜置一夜。吸取上清液1~3ml，50~70℃空氣吹干，加水2~5ml溶解，用微孔濾膜（0.22~0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，備用。

(c)測定法吸取供試品溶液5~40μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得。

最佳測定條件:

(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱柱長為25cm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm；以乙腈為流動相A，以0.3%冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為280nm；柱溫25℃；流速為每分鐘0.9ml。