[發(fā)明專利]一種絞股藍(lán)皂苷A的檢測方法及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310039734.6
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103969351A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 匡艷輝;張慧曄;李銀花;王德勤;李楚源
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州白云山和記黃埔中藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種絞股藍(lán)化學(xué)成分的檢測方法，具體涉及一種絞股藍(lán)皂苷A的檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

絞股藍(lán)為葫蘆科植物絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino及長梗絞股藍(lán)G.Longipes的全草，又名七葉膽、小苦藥等，具有清熱解毒、止咳祛痰、益氣養(yǎng)陰、降低血脂、延緩衰老等作用，是中國藥典中未收藏的品種。

絞股藍(lán)的化學(xué)成分較為復(fù)雜，主要含皂苷類、黃酮類、多糖類、維生素、氨基酸等多種生理活性物質(zhì)，其中的皂苷類是主要活性成分。

然而，目前鮮見對絞股藍(lán)中藥材或藥物組合物制劑中單一成分的檢測方法。例如，絞股藍(lán)總苷片是一種由絞股藍(lán)加工制成的片劑，具有養(yǎng)心健脾、益氣活血、除痰化瘀、降血脂的功效，常用于高血脂癥，見有心悸氣短，胸悶肢麻，眩暈頭痛，健忘耳鳴，自汗乏力或脘腹脹滿等心脾氣虛，痰阻血瘀者，有研究認(rèn)為絞股藍(lán)總苷片治療高脂血癥的療效及安全性優(yōu)于西藥，是一種安全有效耐受性良好的調(diào)脂藥物。雖然使用廣泛，但現(xiàn)有的檢測絞股藍(lán)總苷片的標(biāo)準(zhǔn)仍為1994年的衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)，其含量測定項下采用紫外分光光度法，專屬性不強，線性差，準(zhǔn)確度不高，并且還用到了高氯酸等有強腐蝕性的毒性試劑，不利于對絞股藍(lán)中藥材或藥物組合物及其制劑進(jìn)行快速、有效、安全的測定，也不利于進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。

因此，目前還需要尋找一種更加安全、準(zhǔn)確的絞股藍(lán)成分測定方法。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明的目的在于彌補現(xiàn)有技術(shù)中對絞股藍(lán)中藥材或藥物組合物或其制劑的檢測方法的欠缺，提供了一種專屬性強、準(zhǔn)確度高、操作安全的絞股藍(lán)皂苷A的檢測方法，以及該檢測方法在檢測絞股藍(lán)中藥材或含有絞股藍(lán)的藥物組合物或其制劑中的應(yīng)用，特別是在用于控制絞股藍(lán)總苷片的質(zhì)量中的應(yīng)用。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，目前對絞股藍(lán)進(jìn)行單一成分的檢測方法較為少見。因此，發(fā)明人針對現(xiàn)行的衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)中的有關(guān)檢測方法加以大幅改進(jìn)，通過采用HPLC-ELSD聯(lián)用技術(shù)對絞股藍(lán)皂苷A進(jìn)行定性定量檢測，從而可用于檢測絞股藍(lán)中藥材或藥物組合物或其制劑，以及可特別適用于控制絞股藍(lán)總皂苷片的質(zhì)量。

本發(fā)明提供了一種絞股藍(lán)皂苷A的檢測方法，該方法包括以下步驟：

（1）待測品溶液的制備：將絞股藍(lán)待測品粉碎，稱取0.3~0.5g，可優(yōu)選為0.4g，加入20~30ml甲醇溶解，稱定質(zhì)量，超聲處理20~40min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻、濾過，取續(xù)濾液，即為待測品溶液；

（2）對照品溶液的制備：稱取絞股藍(lán)皂苷A對照品適量，加甲醇溶液，制成每1ml含有0.1~0.3mg絞股藍(lán)皂苷A的溶液，即為對照品溶液；

（3）測定含量：量取同樣體積的1~15μl，可優(yōu)選為10μl的待測品溶液和對照品溶液，分別在相同的色譜條件下采用HPLC-ELSD聯(lián)用技術(shù)測定峰面積，對比計算待測品溶液中絞股藍(lán)皂苷A的含量，然后計算得到絞股藍(lán)待測品中絞股藍(lán)皂苷A的含量。

由于絞股藍(lán)皂苷A的紫外吸收性較差，如仍按照現(xiàn)有的衛(wèi)生部部頒標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測，則干擾較大，結(jié)果準(zhǔn)確度可能難以滿足當(dāng)前的藥物質(zhì)量控制需求，效果不甚理想。通過采用HPLC-ELSD聯(lián)用，不僅克服了UV檢測不準(zhǔn)確的問題，還大大提高了定量檢測的準(zhǔn)確度，同時可避免使用高氯酸等腐蝕性試劑。

所述絞股藍(lán)待測品可以為絞股藍(lán)中藥材，或者含有絞股藍(lán)的藥物組合物或其制劑。作為優(yōu)選，所述絞股藍(lán)待測品為絞股藍(lán)總苷片。

根據(jù)本發(fā)明的檢測方法，其中，在步驟（1）中，將所述絞股藍(lán)待測品粉碎后過60~80目篩，可以優(yōu)選為過80目篩。

根據(jù)本發(fā)明的檢測方法，其中，步驟（1）中，加入25ml的甲醇溶液。作為優(yōu)選，所述甲醇為10~100vol%的甲醇溶液，可以更優(yōu)選為60vol%的甲醇溶液。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果體積分?jǐn)?shù)小于10%，提取效果較差，且需要花費更多的超聲處理時間，同時還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)甲醇的體積分?jǐn)?shù)為60%時，在超聲處理相同時間的情況下，提取效果最好。

根據(jù)本發(fā)明的檢測方法，其中，步驟（1）中，超聲處理的時間可以為30min。作為優(yōu)選，超聲功率為50~1500W，更優(yōu)選為600W。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果超聲處理時間短于30min，則提取效果較差，而如果長于30min，提取效果的增加量不明顯，同時又浪費了處理時間和成本，因而發(fā)明人可優(yōu)選超聲處理時間為30min，提取效果即可達(dá)到最佳的水平。