[發明專利]一種二萜Libertellenone G及其制備方法與用途

無效

• 申請號: 201310039647.0
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103073527A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 譚仁祥;衛蔚;姜榮;趙國琰
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C07D307/77
• 分類號: C07D307/77;C12P17/04;C12N1/14;A61P25/28;C12R1/645
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

1.一種紅花青藤（llligera?rhodantha?Hance）種子內生真菌，菌株編號為sp.S12，其特征是在PDA平板上，菌落暗白，平展，菌絲貼基擰結，經鑒定為鏈霉菌屬Phomopsis，現保藏在中國典型培養物保藏中心，地址：武漢珞珈山武漢大學內，保藏編號為CCTCC?M2013026，保藏日期為2013年1月17日，從其麥芽培養基液體發酵提取物中分離純化獲得具有乙酰膽堿酯酶抑制活性的二萜Libertellenone?G。

2.一種權利要求1所述紅花青藤內生真菌發酵液制備的二萜Libertellenone?G的結構為：

3.根據權利要求2所述的二萜Libertellenone?G的制備方法，其特征是由以下步驟構成：

1）將新鮮的從紅花青藤（Illigera?rhodantha?Hance）種子中分離純化得到的Phomopsis屬菌菌絲體塊接種到每瓶含有400mL麥芽培養基的1000mL錐形瓶中，麥芽培養基成分為生麥芽200g，蔗糖20g，蒸餾水1L，于搖床上在150rpm，28℃條件下培養4天作為種子液，然后將20mL種子液接種于含有400mL的麥芽培養基的1000mL錐形瓶中，在150rpm、20-30℃條件下發酵12天；

2）將步驟1所得發酵液經紗布過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，真空濃縮干燥得棕色粗浸膏F1；

3）將粗浸膏F1用適量的甲醇溶解，然后把溶液置于-4℃的冰箱過夜，過濾除去析出的蠟狀固體，將濾液減壓濃縮，得浸膏F2；

4）對浸膏F2進行硅膠柱層析，依次用4倍體積的氯仿、氯仿：甲醇=100∶1、氯仿∶甲醇=100∶2、氯仿∶甲醇=100∶4、氯仿∶甲醇=100∶8、氯仿∶甲醇=100∶16、甲醇進行洗脫，濃縮氯仿∶甲醇=100∶4段得到黃棕色浸膏F3；

5）對浸膏F3，用反相柱ODS進行分離，先用20％甲醇，酒精計測量，進行洗脫除去大極性雜質，然后用45％甲醇洗脫，真空濃縮洗脫液得黃色固體F4；

6）對浸膏F4進行Sephadex?LH-20分離，洗脫液為甲醇，共得17瓶，將7-9瓶合并得浸膏F5；

7）對浸膏F5，用高效液相色譜法分離得到二萜Libertellenone?G。

4.根據權利要求2所述的二萜作為抑制乙酰膽堿酯酶化合物在制備治療阿爾茨海默氏病藥物中的應用。