[發明專利]一種負載GM1和NGF雙營養因子的神經組織修復支架的制備方法

無效

• 申請號: 201310039519.6
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103083724A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 莫秀梅;賀梨萍;吳瑃辰
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: A61L27/26
• 分類號: A61L27/26;A61L27/22;A61L27/54
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于神經缺損修復用生物材料支架及其制備領域，特別涉及一種負載GM1和NGF雙營養因子的神經組織修復支架的制備方法。

背景技術

周圍神經損傷是臨床常見疾患，臨床上對于周圍神經的離斷傷，常采用顯微外科技術進行端-端外膜縫合、束膜縫合或聯合縫合，以恢復神經的連續性，對于周圍神經的缺損，自體神經移植仍是目前修復的“黃金標準”。近年來，組織工程的興起，為眾多的組織缺損、器官功能衰竭病人的治療帶來了曙光。

利用生物材料構建的神經再生導管，可以為神經細胞獲取營養、生長和代謝提供了一個有利的空間。然而神經再生是細胞、細胞外基質和神經營養因子相互作用的結果，單一的神經導管對受損神經的修復效果是有限的，因為周圍神經再生不僅要恢復其結構，更重要的是恢復其感覺和運動功能，為了達到或超過自體神經移植的修復效果，近年來研究者們不斷致力可控制的活性復合神經導管的制備。近年來有報道神經生長因子（Nerve?growth?factor,NGF）可以對運動神經的再生起促進作用，本研究小組也于2008年報道了用同軸共紡技術將神經生長因子包埋在納米纖維中，使之緩慢釋放得到活性神經導管。但是單獨的NGF對運動神經元的作用還是比較微弱的，且NGF的市售價格較高。因此，引入另一種對NGF具有協同介導作用的營養因子，開發一種成本更低且具有控釋模型的活性神經導管具有多重意義。至目前為止，未見有基于同軸靜電紡絲技術制備神經節苷脂GM1、神經生長因子、NGF雙營養因子負載納米纖維，并最終制備GM1、NGF雙營養因子負載的活性神經修復導管的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種GM1、NGF雙營養因子負載的活性神經修復導管及其制備方法，納米纖維支架由負載GM1、NGF雙營養因子且具有取向結構的同軸靜電紡納米纖維所構成，GM1、NGF雙營養因子負載的納米纖維中呈現“芯-殼”結構，兩種營養因子在神經恢復的期間緩慢釋放，誘導和加速受損神經的再生，而具有取向結構的納米纖維為神經再生提供了正確方向，使神經軸突能夠定向生長，加速了神經恢復速度；該發明制備裝置簡易、控制參數較少、操作簡便、制備過程穩定，有望廣泛應用于神經修復導管的制備過程。

本發明的一種負載GM1和NGF雙營養因子的神經組織修復支架的制備方法，包括：

（1）將GM1和NGF兩種營養因子以質量比1：1共溶于超純水中，完全溶解得到10-20微克每毫升的溶液；

（2）將質量比為25：75的絲素蛋白和聚乳酸-聚己內酯共混物溶于六氟異丙醇，完全溶解攪拌均勻后得到質量體積百分比為8-10%的溶液；

（3）將步驟（1）得到的溶液裝入推進容器，在微量注射泵的驅動下進入同軸裝置復合毛細噴頭的內毛細噴絲口；將步驟（2）得到的溶液裝入推進容器，在微量注射泵的驅動下進入同軸裝置復合毛細噴頭的內外毛細噴絲口之間的環狀空隙處；

（4）啟動推進泵、電壓和電機，開始形成取向接收的同軸靜電紡納米纖維，得到所述支架；

（5）將上述支架取下后采用一密閉容器用蒸汽處理，處理完畢后真空干燥，去除殘留溶劑。

所述步驟（1）中GM1和NGF的超純水溶液配制完畢后在4℃條件下保存，避免營養因子活性的喪失。

所述步驟（2）中的聚乳酸-聚己內酯分子量為Mw≈30萬。

所述步驟（2）中所采用的攪拌方法是磁力攪拌，攪拌速度均為400~600轉每分鐘，攪拌時間為12-24小時。

所述步驟（4）中的噴絲口為同心軸的復合毛細管，所制備的納米纖維具有“芯-殼”結構。

所述步驟（4）中所涉及的紡絲參數為：紡絲噴頭為內層為8號外層為16號的同心軸噴絲頭；注射泵的推進速度分別為芯層0.2毫升每小時和殼層1.0毫升每小時；在同心軸噴絲頭和轉鼓接受器之間接入的調節電壓為12千伏；同心軸噴絲頭和轉鼓接受器之間的距離為15-20厘米；電機提供給轉鼓的轉速為4000轉每分鐘。

所述步驟（5）中的蒸汽處理采用體積分數75%的乙醇；處理時間為24-36h。

所述步驟（5）中的干燥時間為72-96h。

可用作大動物長距離神經缺損修復的一種GM1介導NGF且具有營養因子控釋模型的支架。