[發(fā)明專利]一種中和犬瘟熱病毒的單克隆抗體及抗體組合物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310036576.9
• 申請(qǐng)日: 2013-01-31
• 公開（公告）號(hào): CN103059133A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 畢振威;夏興霞;王永山;潘群興;諸玉梅;董晨紅;歐陽偉;王曉麗;徐立波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/11;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中和犬瘟熱病毒（CDV）單克隆抗體2G3及抗體組合物，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及抗體工程技術(shù)。具體為單克隆抗體2G3對(duì)CDV具有高的中和活性，與另一種作用于CDV不同抗原表位的中和單克隆抗體1D7組合產(chǎn)生抗病毒協(xié)同增強(qiáng)作用，中和能力得到提高，中和CDV毒株范圍廣泛，可應(yīng)用于犬瘟熱（CD）發(fā)病動(dòng)物的臨床治療。

背景技術(shù)

犬瘟熱病毒（CDV）是引起犬、狐貍和水貂等多種動(dòng)物發(fā)生犬瘟熱（CD）的病原，可感染動(dòng)物體內(nèi)多種細(xì)胞和組織，以淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞的親嗜最強(qiáng)，是一種泛嗜性病毒，對(duì)動(dòng)物危害極大。CDV在病毒學(xué)分類上屬于副黏病毒科麻疹病毒屬，為不分節(jié)的負(fù)鏈RNA，主要編碼核衣殼蛋白(?N)、融合蛋白(?F)、血凝或附著蛋白(?H)、基質(zhì)膜蛋白(?M)、大蛋白(?L)和磷蛋白(?P)。病毒RNA被螺旋狀衣殼包裹，由N蛋白、P蛋白和L蛋白組成，N蛋白是病毒蛋白中含量最多、保守性最強(qiáng)的免疫原性蛋白，P蛋白和L蛋白則具有聚合酶活性。病毒囊膜表面的H和F蛋白通過M蛋白與核衣殼連接，在病毒吸附和侵入宿主細(xì)胞過程中起作用。CDV只有一個(gè)血清型，但近年來研究發(fā)現(xiàn)，目前CDV主要流行毒株與免疫預(yù)防使用的弱毒疫苗株存在不同程度的抗原性差異。

犬瘟熱幾乎分布世界各國(guó)，自然宿主廣泛，傳染性強(qiáng)、發(fā)病率和死亡率高，并可引起機(jī)體免疫抑制，繼發(fā)或混合感染其它病原。近年來，我國(guó)寵物犬、警犬、實(shí)驗(yàn)用犬等的飼養(yǎng)量不斷增加，以水貂、狐、貉等為飼養(yǎng)對(duì)象的經(jīng)濟(jì)動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)也迅猛發(fā)展。然而犬瘟熱在我國(guó)的發(fā)病率卻有升高的趨勢(shì)，該病不僅在非免疫動(dòng)物中發(fā)病率和致死率很高，而且用弱毒疫苗免疫動(dòng)物也未能得到完全保護(hù)，有許多免疫動(dòng)物群體暴發(fā)犬瘟熱，損失十分慘重。此外，隨著CDV自然感染的宿主范圍不斷擴(kuò)大，熊貓、熊、獅子和老虎等珍稀野生動(dòng)物也經(jīng)常發(fā)生犬瘟熱，嚴(yán)重危害我國(guó)野生動(dòng)物保護(hù)業(yè)的健康發(fā)展。發(fā)生犬瘟熱的動(dòng)物，種類和數(shù)量較多，經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高，有些伴侶動(dòng)物（如寵物犬等）被視為家庭成員，因此對(duì)犬瘟熱除了積極的預(yù)防外，有必要對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行有效的治療，將損失降到最小。

犬瘟熱是一種病毒性傳染病，一旦發(fā)病還沒有特效的治療藥物，發(fā)病時(shí)用特異性抗體進(jìn)行治療是主要的方法。犬瘟熱病毒的高免血清常用于治療犬瘟熱，但制備成本較高，易傳播其它病毒，抗體中和效價(jià)參差不齊，難以標(biāo)準(zhǔn)化。因此制備特異性好，抗體中和效價(jià)高，易于標(biāo)準(zhǔn)化，制備成本低的單克隆抗體是必然選擇。近幾年的流行病學(xué)調(diào)查顯示，CDV流行毒株與疫苗毒株之間存在變異導(dǎo)致不同程度的抗原性差異，單克隆抗體只針對(duì)病毒的單一抗原表位，因此存在單克隆抗體因病毒抗原表位變異而失去中和作用，不能有效殺滅病毒的風(fēng)險(xiǎn)。聯(lián)合使用針對(duì)不同抗原表位的兩種或兩種以上的單克隆抗體，可以避免或減少因病毒抗原性差異導(dǎo)致的治療失敗，獲得更好的療效。另外，使用兩種或兩種以上的單克隆抗體還有可能產(chǎn)生抗病毒協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，增強(qiáng)抗體中和病毒的能力。美國(guó)FDA批準(zhǔn)的單克隆抗體藥物CL184組合就是采用CR57和CR4098兩個(gè)單克隆抗體的混合物治療狂犬病毒感染，取得了跟市售高免疫血清中提取的免疫球蛋白制品相似或更好的效果。

之前，我們用新分離的CDV?NJ01株作為免疫原制備犬瘟熱病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞庫(kù)，從中篩選到一株分泌高中和活性犬瘟熱病毒單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞1D7株，用其制備的單克隆抗體1D7可以中和不同動(dòng)物源的CDV毒株。本發(fā)明又篩選制備了另一種中和犬瘟熱病毒的單克隆抗體2G3，與單克隆抗體1D7識(shí)別作用的CDV抗原表位不同，而且將單克隆抗體2G3與單克隆抗體1D7進(jìn)行組合，產(chǎn)生抗病毒協(xié)同增強(qiáng)作用，中和病毒的能力得到增強(qiáng)，抗犬瘟熱病毒毒株的范圍更廣泛。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

犬瘟熱是犬和肉食目中多種動(dòng)物的一種高度接觸性傳染病，盡管免疫預(yù)防是防控該病的指導(dǎo)原則，但最近幾年卻不斷有免疫動(dòng)物發(fā)生犬瘟熱的狀況。因此要對(duì)犬瘟熱發(fā)病動(dòng)物進(jìn)行及時(shí)有效地治療。目前臨床上主要采用犬瘟熱的高免血清和單克隆抗體對(duì)其進(jìn)行治療。犬瘟熱高免血清存在生產(chǎn)成本偏高，易傳播血源性疾病，中和效價(jià)參差不齊，難以標(biāo)準(zhǔn)化等問題，單克隆抗體可以彌補(bǔ)以上缺陷，但單克隆抗體識(shí)別作用抗原位點(diǎn)單一，使用一種單克隆抗體治療犬瘟熱，可能對(duì)不斷出現(xiàn)的犬瘟熱病毒變異株失去中和能力。

本發(fā)明的目的是提供一種中和CDV的單克隆抗體及抗體組合物。該單克隆抗體是通過病毒中和試驗(yàn)從建立的CDV單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞庫(kù)中篩選得到的，與另一種識(shí)別作用CDV不同抗原表位的單克隆抗體組合，中和能力得到顯著增強(qiáng)，抗犬瘟熱病毒毒株的范圍更廣泛。

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技術(shù)方案??