[發明專利]桑黃菌中環二肽C6的高壓反相制備分離技術

有效

• 申請號: 201310036531.1
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103145716A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 趙晨;宋愛榮;孫效樂;楊松;張偉鑫
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C07D487/04
• 分類號: C07D487/04;A01G1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.桑黃菌中環二肽C6的高壓反相制備分離方法，其步驟順序如下：

(1)制備桑黃菌粗提物；

(2)將上述步驟（1）所得的桑黃菌粗提物與正相硅膠混勻攪拌，并干燥，進行硅膠正相柱層析，用洗脫劑洗脫2-5次；

(3)收集上述步驟（2）中最后一次洗脫液，減壓濃縮，使用甲醇溶解，甲醇凝膠柱層析，用洗脫劑洗脫；

(4)使用HPLC檢測收集的步驟（3）得到的洗脫液，適當合并洗脫液，減壓干燥；

(5)將步驟（4）得到的產物進行高壓反相層析，洗脫劑為甲醇與水；

(6)對步驟（5）得到的產物進行HPLC檢測，減壓干燥，即為環二肽C6。

2.如權利要求1所述的一種從桑黃菌中分離苯乙醇的方法，其特征在于所述桑黃粗提物，由下述方法制得：

(1)發酵培養基配方以克/100毫升計是：

玉米淀粉????1-5%?????????????葡萄糖??????1-5%

蛋白胨?????0.1-0.5%??????????酵母膏?????0.1-0.5%

硫酸鎂?????0.1-0.5%??????????磷酸二氫鉀?0.01-0.05%

(2)如權利要求1所述桑黃粗提物的發酵培養方法是，將桑黃菌種以常規方法接種到裝有液體培養基的三角燒瓶內，以20～35℃溫度，搖瓶轉速為80～280r/min，pH?3～8條件下，震動培養7～15天；培養中當pH值降到2.5～4時，將搖瓶中的種子接種到50L發酵罐的培養液中，以溫度20～35℃，發酵罐壓力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH?3～8，通氣量0.5～1.1vvm，攪拌速度100～280轉/分的條件，培養7～15天，即可利用桑黃菌絲體發酵全液制備桑黃粗提物；

(3)取步驟(2)中所得桑黃菌絲體發酵全液，將其以常規方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2～1/5；

(4)用體積百分比為60～95%的乙醇對上述步驟(3)濃縮后的發酵液進行提取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的2～5倍，能夠使提取液中乙醇濃度達到60～90%；

(5)對步驟(4)所得提取液在50～70℃條件下，加熱1～2小時；以常規方法進行分離，并通過二級過濾除去雜質，分離獲得乙醇提取液；將上述乙醇提取液以常規方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5～1/10；

(6)將將步驟(5)所得的濃縮液以低溫冷凍干燥的方法進行干燥，得桑黃粗提物。

3.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于所述的環二肽C6為六氫-7?-羥基-3?-（2?-?甲基丙基）吡咯并[1,2-a〕吡嗪-1,4?-?二酮。

4.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(2)中所述的拌樣硅膠為100目正相硅膠，洗脫劑為氯仿和/或甲醇。

5.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(3)中所述的洗脫劑為甲醇。

6.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(4)中所述的HPLC條件為0min：100%水，10min：100%甲醇。

7.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(5)所述的反相材料為C-18或者C-8。

8.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(5)所述的洗脫劑為甲醇：水=25%-75%。

9.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(5)所述的高壓反相層析次數為1-3次。

10.如權利要求1所述的桑黃菌中環二肽C6的分離方法，其特征在于，步驟(6)所述的HPLC出鋒時間為4.95-5.47min。