[發明專利]結縷草耐鹽性主效基因位點qLF-1的分子標記方法

有效

• 申請號: 201310036273.7
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103114141A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 郭海林;劉建秀;丁萬文;陳靜波;陳宣
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

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一、技術領域

本發明提供了結縷草耐鹽主效基因位點qLF-1的分子標記方法，屬于分子遺傳學領域，專用于結縷草耐鹽新品種選育和種質資源的利用。

二、背景技術

?土壤鹽堿化是一個世界性的問題，全世界鹽堿地面積近9.6×10⁸hm²，我國有鹽漬土3.47×10⁷hm²，相當于耕地面積的1/3。隨著濱海鹽堿地區的開發和園林綠化的需要，對草坪草的耐鹽性提出越來越高的要求，結縷草屬植物作為一種重要的草坪草，培育優質耐鹽的結縷草屬植物新品種是一項非常重要的任務。

前期研究結果表明，與其它草坪草相比，結縷草屬植物具有較強的耐鹽性，但結縷草屬內的不同種以及同一種的不同種源間的耐鹽性存在較大的遺傳變異。因此要選擇一種優質耐鹽的結縷草進行鹽堿地綠化，耐鹽性鑒定是一項非常重要的工作。目前，關于結縷草屬植物耐鹽性的鑒定均是通過水培法或土培法進行的，雖然這兩種方法是區試之前，最直接最有說服力的耐鹽性鑒定方法，但是通過以上兩種方法進行耐鹽性鑒定需要非常大的工作量，費時費力，且容易受環境的影響。當從大批量材料中篩選耐鹽材料時有相當的困難。使結縷草耐鹽性育種進程受到很大影響。?

遺傳研究結果表明結縷草的耐鹽性存在主效基因位點（郭海林等.?結縷草（Zoysia?japonica）耐鹽性的遺傳分析.?植物遺傳資源學報,?2012,?13(5):733-738.）。因此利用分子生物學的手段，通過構建結縷草屬植物的遺傳圖譜，并對其耐鹽性的主效基因位點（Quantitative?Trait?Loci,?QTL）進行分析，找到與耐鹽性主效QTL緊密連鎖的分子標記對品種的耐鹽性進行鑒定，將大大地節約成本，提高育種和選擇效率。?

三、發明內容

技術問題：本發明針對上述情況，提供一種結縷草耐鹽主效基因位點qLF-1的分子標記方法，通過檢測這些耐鹽性主效基因位點連鎖的分子標記，可以預測結縷草的耐鹽性強弱，提高耐鹽結縷草的選擇效率。

技術方案：

用標記引物Me12Em1的左端引物序列5’-TGAGTCCAAACCGGTAG-3’?和右端引物序列5’-GACTGCGTACGAATTCAA-3’

對結縷草葉片分離的DNA進行擴增，如果能擴增出180bp?DNA片段，則標志著結縷草耐鹽主效基因位點qLF-1的存在；

或標記引物Me5Em1的左端引物序列5’-TGAGTCCAAACCGGTGC-3’和右端引物序列5’-GACTGCGTACGAATTCAA-3’

對結縷草葉片分離的DNA進行擴增，如果能擴增出315bp的DNA片段，則標志著結縷草耐鹽主效基因位點qLF-1的存在，該主效基因位點位于第4連鎖群的36.28cM處，利用mapQTL5.0軟件測得對結縷草耐鹽性的貢獻率為13.1%。

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有益效果：

本發明所提供的結縷草耐鹽主效基因位點的分子標記方法，其有益效果在于：

通過本發明在國際上首次公開了結縷草耐鹽主效基因位點qLF-1的存在，該主效基因位點位于第4連鎖群的36.28cM處，利用mapQTL5.0軟件測得對結縷草耐鹽性的貢獻率為13.1%。通過與耐鹽主效基因位點相關聯的分子標記Me5Em1-315，Me12Em1-180對結縷草的耐鹽性進行鑒定，可以克服水培法和土培法易受環境影響，工作量大等缺點，特別是對大批量種源材料或者雜交后代進行耐鹽性鑒定時將表現出明顯的優勢，大大減少人力物力的浪費，提高育種和選擇效率。

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附圖說明：

圖1：結縷草耐鹽性QTL連鎖群定位分析示意圖，其中：包含QTL的連鎖區段被顯示，左側為標記之間的距離（cM），右側為標記名稱。

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四、具體實施方式

（一）結縷草F1耐鹽分離群體的構建與耐鹽性鑒定