[發(fā)明專利]抗氯霉素和安普霉素的雙特異性單克隆抗體及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310035550.2
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103087195A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設計）人: 金仁耀
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K16/44
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領域，具體涉及抗氯霉素和安普霉素的雙特異性單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術(shù)

免疫分析方法(Immunoassay，IA)是一種以抗體作為生物化學檢測器對化合物、酶或蛋白質(zhì)等物質(zhì)進行定性和定量分析的一門技術(shù)，是基于抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應，具有特異性強、靈敏度高、方便快速、高通量、檢測成本低、安全可靠等特點。該方法一般不需要貴重儀器，使用人員技術(shù)要求不高，容易普及和推廣，尤其適合現(xiàn)場篩選和大量樣品的快速分析。以該技術(shù)為基礎開發(fā)的一系列檢測產(chǎn)品，如ELISA檢測試劑盒、膠體金試紙條、免疫傳感器等已廣泛應用于現(xiàn)場樣品和大量樣品的快速檢測。

免疫分析法起始于20世紀50年代，首先應用于體液大分子物質(zhì)的分析，1960年，美國學者Yalow和Berson等將放射性同位素示蹤技術(shù)和免疫反應結(jié)合起來測定糖尿病人血漿中的胰島素濃度，創(chuàng)立了放射免疫分析技術(shù)。1968年，Oliver將地高辛同牛血清白蛋白結(jié)合，使之成為人工抗原，免疫動物后成功獲得了抗地高辛抗體，從而開辟了用免疫分析法測定小分子藥物的新領域。在RIA的基礎上，隨著新的標記物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)及新的標記方法的使用，以及電子計算機、自動控制技術(shù)的廣泛應用，派生出許多新的檢測技術(shù)，使免疫分析法逐漸發(fā)展成為一門新型的獨立學科。

由于免疫分析試劑在免疫反應中所體現(xiàn)出的獨特的選擇性和極低的檢測限，使這種分析手段在臨床、生物制藥和環(huán)境化學等領域得到廣泛應用。各種標記技術(shù)(放射性標記、酶標記、熒光標記、金標記、化學發(fā)光等)的發(fā)展，使免疫分析的選擇性更加突出。標記免疫分析一般是將酶、熒光素、放射性核素等標記物對抗體或抗原進行標記，這種標記物既保持了抗體或抗原的活性，也不影響標記物的活性，當它與相應抗體或抗原反應后，可以直接測定復合物中的標記物，從而直接對目標物質(zhì)進行定量分析。通過標記物的信號放大作用，可以提高免疫分析技術(shù)的敏感性。免疫學檢測技術(shù)以其特異性強、靈敏度高、方便快捷、分析容量大、檢測成本低、安全可靠等優(yōu)點，已成為21世紀最具競爭性和挑戰(zhàn)性的檢測分析技術(shù)。

目前采用免疫分析方法進行多殘留檢測常有兩種方法，一種是采用一類藥物的共有結(jié)構(gòu)作為免疫半抗原，獲得對同類農(nóng)藥具有特異性識別反應的廣譜抗體，如Alococer等用有機磷的通用結(jié)構(gòu)膦酸作為半抗原，成功制備了廣譜性的多克隆抗體，且對10種以上的有機磷農(nóng)藥有特異性識別；駱愛蘭等用擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的共有結(jié)構(gòu)間苯氧基苯甲酸（PBA）為半抗原，也成功制備了廣譜性的多克隆抗體，并對5種菊酯有特異性識別。另一種是采用將多個農(nóng)藥的半抗原偶聯(lián)到載體蛋白上制備成人工抗原，經(jīng)過動物免疫獲得對目標農(nóng)藥有特異性識別的“寬譜特異性抗體（broad?specificity?antibody）”，如王姝婷等通過對人工抗原的設計，將克百威、三唑磷、毒死蜱和甲基對硫磷半抗原偶聯(lián)到一個載體蛋白分子上制備出了多抗原決定簇的人工抗原并獲得了能同時識別上述四種農(nóng)藥的“寬譜特異性”多克隆抗體，達到多殘留檢測的目的。

抗體在多殘留免疫分析中的作用非常關鍵，抗體質(zhì)量的好壞直接影響免疫分析的準確性和靈敏度，因此獲得好的抗體是多殘留免疫分析技術(shù)的首要工作，已報道的藥物多殘留免疫檢測的抗體均為多克隆抗體，由于多克隆抗體會隨著動物種類及個體差異而有變化，生產(chǎn)數(shù)量上也會受到一定的限制，制備的抗體可重復性差，在應用中會受到一定的限制，隨著單克隆抗體技術(shù)的出現(xiàn)，解決了抗體制備過程中抗體性狀不穩(wěn)定的問題，并且單克隆抗體技術(shù)獲得的雜交瘤細胞在體外能無限量分泌性狀穩(wěn)定的抗體，因此，在小分子藥物免疫分析中單克隆抗體已逐漸取代多克隆抗體。