[發明專利]抗CD138單克隆抗體可變區序列及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310034972.8
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103103197A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 鄒建炫;楊林;張明;楊春花;李靜文;李順玲;吳純;周延慶;孫其玲;汪偉;洪揚;陳媛
• 申請（專利權）人: 百奇生物科技（蘇州）有限公司;蘇州大學;博生吉醫藥科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N15/10;C12N15/63;C12N5/10;C07K16/30
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，更具體地，涉及抗CD138單克隆抗體可變區序列及其制備方法和應用。

背景技術

Syndecans家族有4個成員，分別為Syndecan-1、Syndecan-2、Syndecan-3、Syndecan-4，其中對Syndecan-1(以下簡稱為CD138)的研究最為廣泛。CD138是一種蛋白聚糖，通過與肝素結合生長因子、可溶性基質成分等多種效應器相互作用來調節細胞行為。CD138分子是跨膜粘結蛋白聚糖家族成員,由胞漿段、跨膜段和胞外段組成，CD138是一類非常復雜的大分子復合物，分子量約為85～92kD，由棱核心蛋白和未分枝的糖胺聚糖鏈共價結合形成的一類糖結合物，亦稱蛋白聚糖，蛋白聚糖存在于所有哺乳動物中，是細胞間質、細胞質膜的重要組成成分。

對于CD138的分子結構，主要是根據其cDNA的序列分析而來，CD138分子屬I型跨膜蛋白，有一個N端信息肽、一個含糖胺聚糖附著處的膜外區、一個疏水跨膜區和一個短的C端胞漿區組成。CD138的跨膜區和胞漿區是高度保守的，胞漿區肽鏈較短，由13個氨基酸組成，與跨膜區緊密相連，CD138在C末端尾都有一個4肽序列，目前胞漿區部分的功能還不太清楚。

CD138是一種跨膜蛋白聚糖，可表達在各種來源的腫瘤細胞表面，包括骨髓瘤、卵巢癌、乳腺癌、肝癌、何杰金氏病及與某些HIV有關的淋巴瘤。當正常細胞惡變后，細胞膜表面CD138分子的表達常發生改變，并且與腫瘤的惡性程度、預后有一定相關性。CD138是一種粘附分子，它在腫瘤細胞膜表面表達減少或者缺失，使細胞的生長、分化等行為發生紊亂，導致了瘤細胞大量繁殖，表現出極強的侵襲活性和轉移特性。

CD138與腫瘤的發生、發展有一定的相關性，并與腫瘤的分型、分化、分期有一定關系。因此我們可根據癌組織中CD138表達程度來判斷腫瘤分型，并采取相應治療手段。CD138可促進細胞與細胞，細胞與基質之間的粘附作用，其具有抑制腫瘤細胞生長、侵襲和轉移的特性，可用于腫瘤的免疫或基因治療。隨著分子生物學的不斷發展，癌基因研究的不斷深入，CD138在腫瘤診斷、病情進展、轉移潛能和預后的評價等方面具有很大的潛在價值。

發明內容

如上所述，對CD138的分析研究越來越多，基于這一背景，本發明的目的是構建抗CD138單克隆抗體的重鏈可變區的核苷酸序列和輕鏈可變區的核苷酸序列，同上提供制備上述核苷酸序列的方法，以及上述核苷酸序列的應用。

為實現上述目的，本發明用CD138蛋白設計合成的多肽和U266細胞作為抗原，免疫小鼠后，經檢測得到相應抗體表達呈陽性的小鼠，取表達呈陽性小鼠的脾臟，分離脾細胞后，融合脾細胞和骨髓瘤細胞，在HAT培養基中培養后，檢測得到抗體表達陽性克隆，提取陽性雜交瘤細胞總RNA，以總RNA中的mRNA為模板，反轉錄得到相應抗體基因的cDNA，再通過PCR擴增獲得相應抗體重鏈可變區和輕鏈可變區，由此實現本發明。

本發明提供了下述各項：

抗CD138單克隆抗體可變區序列，包含六種核苷酸序列，所述核苷酸序列分別為58208（1）-VH、58208（1）-VL、58208（2）-VH、58208（2）-VL、59166-VH和59166-VL。

優選的，所述核苷酸序列58208（1）-VH和58208（1）-VL由保藏號為480CT5.4.3的雜交瘤細胞株制備而成，所述核苷酸序列58208（2）-VH和58208（2）-VL由保藏號為480CT13.4.3.2的雜交瘤細胞株制備而成，所述核苷酸序列59166-VH和59166-VL由保藏號為587CT7.3.6.5的雜交瘤細胞株制備而成。

優選的，還包括與上述六種核苷酸序列具有相同氨基酸序列產物的核苷酸序列。

優選的，還包括：經過一個或者幾個堿基替換、缺失或添加后仍具有與所述核苷酸序列產生的氨基酸序列具有相同活性的核苷酸序列。

制備以上所述的抗CD138單克隆抗體可變區序列的方法，包括以下步驟：

（1）雜交瘤細胞的制備：首先用CD138蛋白設計合成的多肽以及U266細胞作為抗原來免疫雌性健康的BALB/c小鼠，挑選出免疫后抗體表達呈陽性的小鼠，取其脾臟細胞，然后將分離的小鼠脾臟細胞與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞；