[發明專利]一種仿刺參體腔液病毒的快速定量檢測方法有效
| 申請號： | 201310034673.4 | 申請日： | 2013-01-24 |
| 公開（公告）號： | CN103966357A | 公開（公告）日： | 2014-08-06 |
| 發明（設計）人： | 姜北;周遵春;關曉燕;董穎;楊愛馥;王擺;陳仲;高杉;蔣經偉 | 申請（專利權）人： | 遼寧省海洋水產科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64;C12R1/93 |
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| 地址： | 116023 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 刺參 體腔 病毒 快速 定量 檢測 方法 | ||
1.一種仿刺參體腔液病毒的快速定量檢測方法，該方法包括：
(1)將無菌注射器針頭從刺參排泄孔上方腹部1.5～2cm處刺入腹腔，進入腹腔0.5～1cm后定量抽取體腔液1.5～2mL；
(2)將體腔液采用凍融處理，再進行超聲破碎；
(3)將體腔液用孔徑為0.02μm的氧化鋁濾膜過濾，在負壓(15～20kPa)條件下把樣品抽濾至干；
(4)在冰浴條件下，用濃度為0.1％～0.5％的核酸熒光染色劑工作液將(3)中經抽濾的氧化鋁濾膜避光染色10～15min；干燥后制片，在熒光顯微鏡藍色激發光道、油鏡下觀察病毒顆粒，計算病毒顆粒數。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征是所述凍融處理是將體腔液放置-80℃冰箱中采用慢凍緩融的方法。
3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征是所述凍融次數為3～4次。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征是所述超聲破碎次數為3～4次。
5.根據權利要求4所述的檢測方法，其特征是所述超聲破碎是90秒/次，每次間隔5min，所述間隔期間是在冰浴條件下降溫。
6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征是所述過濾使用的濾器襯墊直徑為13mm或25mm或47mm。
7.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征是所述過濾還包括在所述氧化鋁濾膜上方放置孔徑為0.45μm的微孔濾膜。
8.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征是所述核酸熒光染色劑為SYBR Green I或Gene Finder或GelGreen。
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