[發明專利]一種江蘺內生枯草芽孢桿菌及其應用

無效

• 申請號: 201310034670.0
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103966114A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 張付云;王維才;劉曄;楊陽;何云海
• 申請（專利權）人: 大連海洋大學;張付云
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/74;A61P31/04;A01N63/02;A01P1/00;A01P3/00;A23B7/155;C12R1/125
• 代理公司: 大連非凡專利事務所 21220
• 代理人: 曲寶威

技術領域

本發明涉及農業、食品及醫藥領域，特別是一種江蘺內生枯草芽孢桿菌NSN2（Bacillus subtilis NSN2）菌株及該菌株在對細菌和植物病原菌的生長抑制和其代謝產物在抑菌方面的應用。

背景技術

江蘺(G.verrucosa)又名龍須菜、鹿角菜，鳳菜等,是多年生的大型紅藻，屬于紅藻門真紅藻綱、杉藻目江蘺科江蘺屬。江蘺屬共約近100種，江蘺新鮮的藻體具有獨特的風味和營養保健功能，可用作鮑魚餌料或者加工成海洋蔬菜作為風味食品，經常食用江蘺，可以用來防治肥胖、膽結石、便秘、腸胃病等代謝性疾病以及降血脂和降膽固醇疾病。另外，研究表明許多海洋活性物質是由海藻共附生菌產生的，海藻共附微生物是一個潛在的資源庫，但這些微生物及其代謝產物迄今為止尚未被充分利用。

發明內容

本發明的目的是提供一種制備工藝簡單、成本低的江蘺內生枯草芽孢桿菌NSN2（Bacillus subtilis NSN2）菌株，以利用江蘺在細菌和植物病原菌的生長抑制方面、其代謝產物在抑菌方面發揮作用。

本發明的一種江蘺內生枯草芽孢桿菌NSN2（Bacillus subtilis NSN2）菌株，按如下方法獲得：

a. 取干凈、新鮮的江蘺用無菌海水沖洗3-5次后，分別用75%乙醇和0.02%次氯酸鈉對江蘺進行體外消毒，消毒后研磨并將研磨液均勻涂布于牛肉膏蛋白胨平板培養基上，37℃恒溫培養2天；

b. 挑取單個形態各異的菌落反復劃線培養至出現純菌株，即得江蘺內生枯草芽孢桿菌NSN2（Bacillus subtilis NSN2），該菌的菌體長和寬分別為1.54-3.08μm、0.70-0.77μm，革蘭氏反應為陽性，芽孢為橢圓狀；菌落特征為圓形，較小，邊緣光滑，不透明，白色；過氧化氫酶陽性，能在7%氯化鈉中生長，酸性條件生長，在0-55℃可生長；該菌株已于2012年12月31日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號: CGMCC No: 7082。

本發明的一種江蘺內生枯草芽孢桿菌NSN2（Bacillus subtilis NSN2）菌株在細菌和植物病原菌的生長抑制方面、其代謝產物在抑菌方面的應用。

本發明提供的菌株及其代謝產物抑菌活性強，制備方法簡單，成本低廉，菌株及其代謝產物可應用于醫藥抑菌、生物防治、食品保鮮、防腐等領域，具有產業價值。

本發明的江蘺內生枯草芽孢桿菌菌株已于2012年12月31日保藏于位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號: CGMCC No: 7082。

具體實施方式

a. 取干凈、新鮮的江蘺用無菌海水沖洗3-5次后，分別用75%乙醇和0.02%次氯酸鈉對江蘺進行體外消毒，消毒后研磨并將200 μL研磨液均勻涂布于牛肉膏蛋白胨平板培養基上，37℃恒溫培養2天。

b. 挑取單個形態各異的菌落反復劃線培養至出現純菌株，即得江蘺內生枯草芽孢桿菌NSN2（Bacillus subtilis NSN2），該菌的菌體長和寬分別為1.54-3.08μm、0.70-0.77μm，革蘭氏反應為陽性，芽孢為橢圓狀；菌落特征為圓形，較小，邊緣光滑，不透明，白色；過氧化氫酶陽性，能在7%氯化鈉中生長，酸性條件生長，在0-55℃可生長；該菌株已于2012年12月31日保藏于位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏號: CGMCC No: 7082。

用濾紙片法檢測各純菌株的抑菌活性。

抑菌活性的檢測：大腸桿菌Escherichia coli（EC）、變形桿菌Proteus vulgaris（PV）、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus （SA）、產氣桿菌Enterobacter aerogenes（EA）和枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis（BS）均采用現有的牛肉膏蛋白胨培養基。上述均受贈于中科院大連化學物理研究所。將各菌種分別接種于牛肉膏蛋白胨液體培養基中，振蕩培養24 h作指示菌。