[發明專利]塵螨過敏原Derf29和Derf30及其基因和應用

無效

• 申請號: 201310034209.5
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103073636A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 賴仞;安輸;容明強;李東升
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明動物研究所
• 主分類號: C07K14/79
• 分類號: C07K14/79;C12N9/90;C12N15/12;C12N15/61;A61K39/35;A61P37/08
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發明涉及一種塵螨過敏原Der?f?29和Der?f?30及其基因和應用，屬于生物醫學技術領域。

背景技術：

過敏性疾病（如哮喘、過敏性鼻炎等）是臨床上的常見病、多發病，世界各國過敏性疾病的總發病率高達10-30%，是當前世界性的重大衛生學問題，目前我國現有哮喘患者2000多萬，過敏性鼻炎患者5000多萬，并且其發病率和死亡率仍呈上升趨勢，近二十年來發病率幾乎翻了一倍。在引起過敏性疾病的眾多吸入性過敏原中，塵螨是導致呼吸道變態反應性疾病的最重要因素。自從Voorhorst和Spieksma（1964）首次證實塵螨及代謝產物是屋塵中的主要過敏原以來，世界各國（歐美國家、日本、中國等）變態反應學工作者通過大量調查也一致證實塵螨是世界性的主要變應原。塵螨在過敏性疾病患者特異性免疫診斷中陽性率約70-80%。自從Noon和Freeman（1911）首次應用梯牧草花粉變應原浸液（allergen?extract）用于治療花粉癥以來，脫敏治療至今已有90多年的歷史。隨著對變態反應疾病發病機制的深入研究以及免疫治療機制的進一步了解，WHO（1997）建議將變應原浸液改稱為變應原疫苗（allergen?vaccine），并且在《WHO有關免疫治療的指導文件》（1998）指出：（1）鼓勵應用和發展標準化的變應原疫苗；（2）成功的免疫治療取決于高質量的變應原疫苗。因此，研制出新一代高效變應原疫苗仍是國內外該領域研究熱點。

由于塵螨系醫學節肢動物，結構和成份復雜，盡管目前人們在塵螨數百種蛋白中已初步鑒定出16種過敏原成份，研究顯示塵螨含有的過敏原多達30余種。就某一個塵螨過敏病人而言，他可能僅對塵螨中的一類或數類過敏原蛋白產生過敏反應。而目前在臨床上用于塵螨過敏患者診斷和脫敏治療的仍然為塵螨粗浸液，其中含有大量對患者非特異的過敏原及其它雜質，這嚴重阻礙了塵螨過敏原試劑標準化的制定及其在臨床上的使用。所以進一步探明塵螨過敏原的確切組分，將會為塵螨過敏患者帶來個體化的脫敏治療。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種塵螨過敏原Der?f?29和Der?f?30及其基因和應用。

本發明的技術方案如下：

Der?f?29是我們首次從塵螨勻漿中分離純化得到的一種新的過敏原蛋白，它屬于一類Peptidyl-prolyl?cis-trans?isomerase蛋白家族，分子量約15kDa。Der?f?29由164個氨基酸組成，其氨基酸序列如下（SEQ?ID?NO:1）：

MALPRVFFDIAADNQPLGRIVIELRSDVVPKTAENFRALCTGEKGFGFKSSSFHRIIPNF?60

MIQGGDFTNHNGTGGKSIYGNKFADENFTLQHTGPGIMSMANAGPNTNGSQFFITTVKTT?120

WLDGKHVVFGSVVEGMDIVKKVESYGSQSGKPSKKVTIANCGQL?????????????????164

塵螨過敏原Der?f?29基因克隆步驟包括：塵螨總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉錄及cDNA文庫構建，設計引物，利用PCR方法擴增編碼基因。基因測序結果表明塵螨過敏原Der?f?29的編碼基因（GenBank?accession?AY283280.1）由?495個核苷酸組成，該基因的5’端至3’端序列為(核苷酸序列為SEQ?ID?NO:2)：

atggcacttc?ctcgtgtttt?tttcgatatt?gctgccgata?atcaaccatt?gggtcgtatt?60

gtcattgagc?tccgtagtga?tgttgtgccc?aaaacagcgg?aaaatttccg?tgcactttgc?120

actggtgaaa?aaggatttgg?ttttaaatca?tcctcatttc?atcgtatcat?acccaatttt?180

atgatccaag?gcggtgattt?cactaaccat?aatggtactg?gtggtaaatc?catctatggt?240

aacaaatttg?ccgatgaaaa?tttcacactt?caacacaccg?gacctggtat?catgtccatg?300

gcaaatgccg?gtccaaacac?caatggttca?cagtttttca?ttacaaccgt?aaagactacc?360