[發(fā)明專利]建立全雌黃顙魚繁育種群的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310034096.9
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103070120A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉漢勤;管波;田華;徐江;侯昌春
• 申請（專利權(quán)）人: 水利部中國科學(xué)院水工程生態(tài)研究所
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00;A01K67/027
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 鐘鋒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及魚類的人工性別控制技術(shù)，屬于一種魚類生理遺傳繁殖的方法，是以人工性逆轉(zhuǎn)、篩選、擴群等技術(shù)控制魚類性別技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

生產(chǎn)單性雌魚有幾種方法可供選擇：如人工選擇、雌性激素直接誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)、雌核發(fā)育和性別特異的DNA探針技術(shù)等。但因人工挑選的勞動強度大，而且不能準(zhǔn)確區(qū)分雌雄魚。雌性激素直接誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)是給魚苗投喂雌性激素，在激素的作用下，使雄性魚發(fā)生性逆轉(zhuǎn)，成為雌性魚。這種方法不能達到全雌的目的，且有性激素殘留的危險，不利于生產(chǎn)，許多國家早已禁用。雌核發(fā)育產(chǎn)生全雌魚應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)最大困難是二倍體出現(xiàn)頻率低，仔幼魚階段成活率差，個體差異大，能達到性成熟的不多。中國科學(xué)院水生生物研究所和歐美等國的魚類遺傳育種學(xué)家將人工雌核生殖與激素誘導(dǎo)性反轉(zhuǎn)結(jié)合起來，先后在鯉魚和鮭鱒魚類中生產(chǎn)出全雌性魚類，并成功地用于養(yǎng)殖實踐。性別特異的DNA探針與性反轉(zhuǎn)結(jié)合生產(chǎn)全雌性養(yǎng)殖群體的技術(shù)的局限性是迄今為止，在脊椎動物中克隆的性別特異DNA序列還很少。至于全雌黃顙魚繁育種群的建立，尤其是采用性逆轉(zhuǎn)和黃顙魚染色體特異分子標(biāo)記的集成技術(shù)產(chǎn)生全雌黃顙魚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容

黃顙魚是淡水養(yǎng)殖的重要魚類。在相同的養(yǎng)殖條件下，雄性黃顙魚比同胞雌魚的生長速度快30%以上，因此，發(fā)明人發(fā)明了采用性逆轉(zhuǎn)和雌核發(fā)育持續(xù)產(chǎn)生全雄黃顙魚（專利號：ZL200610166518.8）的方法，建立了超雄黃顙魚繁育種群（專利號：ZL200810197519.8）。為了持續(xù)生產(chǎn)全雄黃顙魚，需要建立與超雄黃顙魚繁育種群配套的全雌黃顙魚繁育種群。發(fā)明人分析國內(nèi)外魚類性別控制的技術(shù)經(jīng)驗，提出采用激素性逆轉(zhuǎn)結(jié)合黃顙魚染色體特異分子標(biāo)記的集成技術(shù)，以此達到建立全雌黃顙魚繁育體系的目的。

為了實現(xiàn)該目的，本發(fā)明采用的主要技術(shù)方案是：

建立全雌黃顙魚繁育種群的方法，包括如下步驟：

步驟1、人工催產(chǎn)與人工授精：選擇體表無傷、腹部膨大柔軟、性腺發(fā)育良好的普通雌魚（15‐20尾/kg）用絨毛膜促性腺激素、魚用促黃體素釋放激素類似物2號和多巴胺拮抗物地歐酮對每條魚胸鰭基部進行一次注射或兩次注射，注射總劑量為每kg雌魚使用HCG2500～3000IU+LRH‐A₂30～40ug+DOM6～10mg，將雌魚置于26℃的水中，經(jīng)24小時后擠出成熟的卵子，將卵子置于冰浴上低溫保存?zhèn)溆茫贿x取生殖突微紅的雄魚（15‐20尾/kg），每kg雄魚使用HCG2500～3000IU+LRH‐A₂15～20ug+DOM6～10mg注射催產(chǎn)，一次注射，催產(chǎn)后對雄魚進行解剖取出精巢，用剪刀將精巢剪碎，再用精子保存液洗濾出精子，將精子置于冰浴上低溫保存?zhèn)溆茫蝗÷炎雍途踊旌线M行干法人工受精；把受精卵置于27℃生化培養(yǎng)箱中恒溫孵育成雄魚和雌魚魚苗并全部出膜；待卵黃吸收后，魚苗用鹵蟲幼體作為開口餌料；

步驟2、性逆轉(zhuǎn)：將普通雌性黃顙魚性逆轉(zhuǎn)成生理雄魚，以鹵蟲幼體作為雄激素載體，將鹵蟲幼體在100～250IU的甲基睪丸溶液中浸泡1小時，再抽濾取出富集雄激素的鹵蟲投喂已開口攝食的人工繁殖黃顙魚苗，每天上午、下午和晚上各投喂一次，投喂量以30分鐘內(nèi)吃完為準(zhǔn)，連續(xù)投喂40天，經(jīng)雄性激素處理后存活的魚苗中部分XX♀雌魚性逆轉(zhuǎn)成為XX♂生理雄魚，XY♂雄魚不變；將用甲基睪丸處理過的所有幼魚轉(zhuǎn)移至水泥池用海馬牌幼鱉粉狀配合飼料培育至8cm以上，即可從外表區(qū)分雌雄；雄魚的生殖器已開始突起，而雌魚則無；剔除XX♀黃顙魚，剩雄性黃顙魚XX♂、XY♂備用；

步驟3、性逆轉(zhuǎn)魚的遺傳性別鑒定：用Y染色體特異標(biāo)記Pf‐Y62引物對篩選出的性逆轉(zhuǎn)黃顙魚（XX♂、XY♂）進行基因型PCR鑒定（Y染色體特異標(biāo)記Pf‐Y62引物及具體的基因型PCR鑒定方法參照專利ZL200810236650.0黃顙魚性染色體特異分子標(biāo)記及遺傳性別鑒定方法中的相關(guān)內(nèi)容），剔除含有Y染色體的黃顙魚（即XY♂），留XX♂生理雄魚備用；

步驟4、擴群：XX♀雌魚和XX♂生理雄魚繁育種群的快速擴群，取步驟3中已被確認的養(yǎng)至性成熟的XX♂生理雄魚與普通XX♀雌魚交配，產(chǎn)生100%XX♀雌魚，在魚苗開口時，取一部分XX♀雌魚按步驟2，用雄激素誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)成為XX♂生理雄魚；

步驟5、全雌黃顙魚繁育種群的建立：取步驟4中XX♀雌魚和XX♂生理雄魚交配，可持續(xù)生產(chǎn)XX♀雌魚，重復(fù)步驟4和步驟5，建立全雌黃顙魚繁育種群。

更進一步的方案是：所述所述的雌魚的兩次注射間隔時間10小時。