[發明專利]一種能降解無定形纖維素的基因重組釀酒酵母有效
| 申請號： | 201310033518.0 | 申請日： | 2013-01-29 |
| 公開（公告）號： | CN103103139A | 公開（公告）日： | 2013-05-15 |
| 發明（設計）人： | 劉澤寰;龔映雪;唐根云;黎惠忠;肖文娟;李晶博;林蔣海 | 申請（專利權）人： | 廣州分子生物技術有限公司;暨南大學 |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N15/56;C12N15/81;C12P7/10;C12R1/865 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 陳衛 |
| 地址： | 510320 廣東省廣州市廣州國際生*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 降解 無定形 纖維素 基因 重組 釀酒 酵母 | ||
1.?一種能降解無定形纖維素的基因重組釀酒酵母，其特征在于該基因重組釀酒酵母是將內切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因通過釀酒酵母表達載體同時轉入釀酒酵母并獲得正確的分泌表達而構建成的。
2.?根據權利要求1所述的基因重組釀酒酵母，其特征在于所述的釀酒酵母表達載體為釀酒酵母多基因共表達載體。
3.?根據權利要求2所述的基因重組釀酒酵母，其特征在于所述釀酒酵母多基因共表達載體為載體pScIKP。
4.?權利要求1至3任一項所述的基因重組釀酒酵母的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1.將內切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因接入釀酒酵母表達載體中，構建重組雙基因共表達載體；
S2.將上述構建得到的重組雙基因共表達載體用限制性內切酶切割，使之線性化后轉化到釀酒酵母中，構建轉基因釀酒酵母。
5.?根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，S1構建重組雙基因共表達載體包括如下步驟：
S11.分別將內切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因進行PCR擴增；
S12.用限制性內切酶分別切割載體、內切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因；
S13.將內切β-1,4-葡聚糖酶基因和β-葡萄糖苷酶基因接入釀酒酵母表達載體中。
6.?根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，S2中所述的限制性內切酶為Apa?I。
7.?根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，S2中所述的轉化是使用電轉化法、冷凍法或化學試劑法進行轉化。
8.?根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，S12中用于切割內切β-1,4-葡聚糖酶基因的限制性內切酶為BamH?I和Spe?I，用于切割β-葡萄糖苷酶基因的限制性內切酶為Spe?I；S13中使用的限制性內切酶為Nhe?I和Xba?I。
9.?根據權利要求1、4、5或8所述的構建方法，其特征在于，所述的內切β-1,4-葡聚糖酶基因為綠色木霉的內切β-1,4-葡聚糖酶基因eg3；所述的β-葡萄糖苷酶基因為綠色木霉的β-葡萄糖苷酶基因bgl1。
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