[發(fā)明專利]一種指導鉑類藥物用藥的多重基因檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310033312.8
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103074437A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設計）人: 南麗;黃迎彬;吳勇
• 申請（專利權）人: 海爾施生物醫(yī)藥股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種指導鉑類藥物用藥的多重基因檢測試劑盒，包括超純水、X溶液、10×PCR緩沖液、PCR引物、25mM氯化鎂溶液、DNA聚合酶和陽性對照品，其特征在于所述的PCR引物包括以下6個與鉑類藥物用藥相關基因上的8個SNP位點上的不同基因型的正反向擴增引物、人DNA內參以及反應內參的正反向擴增引物，其基因序列如下表所示：

2.根據權利要求1所述的一種指導鉑類藥物用藥的多重基因檢測試劑盒，其特征在于：所述的X溶液包括三磷酸脫氧核苷酸和通用引物，通用引物正向擴增引物序列為AGGTGACACTATAGAATA，反向擴增引物序列為GTACGACTCACTATAGGGA，通用引物正向擴增引物帶熒光標記。

3.根據權利要求1所述的一種指導鉑類藥物用藥的多重基因檢測試劑盒，其特征在于：所述的陽性對照品為連接有設計上述8種SNP上不同基因型的引物、DNA內參和反應內參的引物的基因保守序列的pMD18-T的克隆載體。

4.一種利用權利要求1-3中任一項所述的指導鉑類藥物用藥的多重基因檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟：

（1）采集樣本并提取核酸

采集腫瘤患者口腔拭子或血液樣品，從中提取核酸；

（2）以提取的核酸為模板進行PCR反應

取DNA樣品2μL，10×PCR緩沖液2μL，25mM的氯化鎂4μL，PCR引物溶液2μL，DNA聚合酶1.4μL，X溶液2μL混勻后加入到96孔樣品板上進行PCR反應，反應條件：95°C10分鐘；94°C30秒鐘，55°C30秒鐘，70°C1分鐘，循環(huán)35次；70°C1分鐘；4°C直至收取PCR產物；其中所述的X溶液為包括三磷酸脫氧核苷酸和通用引物，所述的通用引物正向擴增引物序列為AGGTGACACTATAGAATA；反向擴增引物序列為GTACGACTCACTATAGGGA，所述的通用引物正向擴增引物帶熒光標記，PCR引物溶液中各PCR引物濃度均為200nM，所述的PCR引物包括以下6個與鉑類藥物用藥相關基因上的8個SNP位點上不同基因型的正反向擴增引物、人DNA內參以及反應內參的正反向擴增引物，基因序列如序列表中SEQ?ID?NO.1～NO.36所示；

（3）GeXP遺傳分析儀毛細電泳分離樣品

取PCR產物0.1-1μL，Beckman?GeXP系統(tǒng)配套的上樣緩沖液38.75μL，DNA標準品0.5μL，礦物油一滴混合均勻后加入到96孔分離液板上進行毛細電泳分離樣品，將GeXP遺傳分析儀的軟件獲得的圖譜與標準圖譜對比，獲得指導鉑類藥物用藥相關基因的SNP位點的等位基因型。