[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310033074.0
• 申請(qǐng)日: 2013-01-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103149356A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張明洲;王旻子;程曄;魏建良;吳海芬;陳宗倫
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 杭州迪恩科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/569
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/569;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述檢測(cè)試紙卡由外殼(1)和其內(nèi)部的試紙條(2)構(gòu)成，外殼(1)由上板(3)和下板(4)構(gòu)成，上板(3)有檢測(cè)窗(5)和加樣孔(6)，試紙條(2)由底板(7)和在底板(7)上依次粘貼的樣品吸收墊(8)、膠體金標(biāo)記墊(9)、檢測(cè)反應(yīng)區(qū)(10)構(gòu)成，樣品吸收墊(8)正對(duì)加樣孔(6)，檢測(cè)反應(yīng)區(qū)(10)正對(duì)檢測(cè)窗(5)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述膠體金標(biāo)記墊(9)包被有牛布魯氏菌抗體-膠體金標(biāo)記物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述牛布魯氏菌抗體-膠體金標(biāo)記物的制備方法為：

(1)將牛布魯氏菌抗體在0.005M/L?pH7.0的NaCl溶液中4℃透析過(guò)夜，4℃，10000-12000rpm條件下離心1h；

(2)將OD526的膠體金溶液的pH調(diào)節(jié)至5.0-9.0；

(3)將步驟(1)離心得到的牛布魯氏菌抗體用0.005M/L?pH9.0的硼酸鹽緩沖溶液稀釋至5μg/ml～50μg/ml，取1ml稀釋后的牛布魯氏菌抗體加入到1ml膠體金溶液中，振蕩混勻，靜置5min，加入0.1ml10％的NaCl溶液，混勻后靜置2h，離心純化制得膠體金標(biāo)記的牛布魯氏菌抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述檢測(cè)反應(yīng)區(qū)(10)由包被牛布魯氏菌抗體-載體蛋白偶聯(lián)物的測(cè)試區(qū)(11)和包被牛布魯氏菌抗原的質(zhì)控區(qū)(12)組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述牛布魯氏菌抗體-載體蛋白偶聯(lián)物的制備方法為：

(1)取5mg牛布魯氏菌抗體和2.5mg載體蛋白溶解在250μl?TE?buffer中，充分震蕩使其溶解，再取EDC·HCl79mg充分溶解于250μl?TE?buffer中；

(2)將牛布魯氏菌抗體和載體蛋白的混合溶液邊震蕩邊逐滴加入EDC·HCl溶液，在37℃搖床中反應(yīng)2h以上；

(3)先用Sephadex柱分離步驟(2)反應(yīng)后的偶聯(lián)產(chǎn)物和未結(jié)合的牛布魯氏菌抗體，再透析純化，將0.5ml溶液在PBS中透析3d，每天換液兩次，每次換液200ml，透析產(chǎn)物分裝成20份，于-20℃保存，得到牛布魯氏菌抗體-載體蛋白偶聯(lián)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、血藍(lán)蛋白或雞卵白蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述樣品吸收墊含有植物凝集素或抗紅細(xì)胞抗體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述一種利用夾心法檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡，其特征在于，所述抗紅細(xì)胞抗體為使用人紅細(xì)胞免疫小鼠、羊或兔，常規(guī)制備的抗紅細(xì)胞單克隆抗體。

9.應(yīng)用權(quán)利要求1所述檢測(cè)牛布魯氏菌抗原的檢測(cè)試紙卡的檢測(cè)方法，其特征在于，按照如下步驟進(jìn)行：

(1)血液樣品處理：血液標(biāo)本收集在潔凈、干燥的容器內(nèi)，將采集的新鮮血液加入濃度為2.5％抗凝劑；

(2)取經(jīng)過(guò)處理的血液樣品100μL，滴入加樣孔；

(3)待血液樣品流過(guò)測(cè)試區(qū)和質(zhì)控區(qū)，判定樣品中是否含有牛布魯氏菌抗原，判定規(guī)則如下：

陰性(-)：僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紫紅色條帶，在測(cè)試區(qū)內(nèi)無(wú)紫紅色條帶出現(xiàn)；

陽(yáng)性(+)：兩條紫紅色條帶出現(xiàn)，一條位于測(cè)試區(qū)內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)內(nèi)；

無(wú)效：當(dāng)質(zhì)控區(qū)不顯示出紫紅色條帶，則無(wú)論測(cè)試區(qū)顯示出紫紅色條帶與否，該試紙卡判為無(wú)效。