[發明專利]使用石蠟包埋切片樣品同步檢測14種抗腫瘤用藥相關基因表達水平的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310032768.2
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103305600A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 南麗;徐冰;吳勇
• 申請（專利權）人: 海爾施生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N27/447
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及抗腫瘤用藥相關基因表達水平的試劑盒及其檢測方法，尤其是涉及一種基于GeXP多重基因表達遺傳分析系統使用石蠟包埋切片樣品同步檢測14種抗腫瘤用藥相關基因表達水平的試劑盒及其檢測方法。?

背景技術

最近幾年，藥物遺傳學/藥物基因組學在抗腫瘤藥物作用機制等方面的研究獲得了突破性進展，發現某些抗腫瘤藥物對腫瘤細胞的殺傷效應與特定的一種（或一組）基因的表達和/或多態性顯著相關。通過相關基因的檢測，預測化療及靶向藥物的療效，選擇合適的藥物進行個體化化療，已經成為提高療效、減少無效治療的合理選擇。?

個體化治療是根據患者的遺傳學特點，采用特異和最佳的藥物方案進行治療的方法。大量臨床數據表明，腫瘤組織中ERCC1/RRM1/TYMS/TUBB3等靶標基因mRNA表達水平可以分別預測患者對鉑類/吉西他濱/氟尿嘧啶類/抗微管類等常用化療藥物的反應。根據患者腫瘤組織中mRNA表達水平的檢測結果，制訂個體化治療方案，有助于選擇適合患者的化療藥物，提高治療的針對性。通過靶標檢測選擇化療藥物可以避免無效或有害的化療、節省寶貴的治療時間與治療費用，提高患者生活質量。?

目前，傳統的檢測基因表達（mRNA水平）的方法有以下多種：?

（1）PCR檢測方法：目前經常應用的有實時熒光定量PCR、免疫PCR、反轉錄PCR等，都是針對病原體的特異性靶基因進行檢測。其中，熒光定量PCR檢測方法最為成熟。該方法的優點是靈敏性高，并可精確定量；該方法也有其缺點，通量低：一次只能檢測一個基因的表達水平；成本相對較高：因一次只能檢測一個基因，當一個樣品同時需要檢測多個基因表達時，必須一個一個檢測，成本相對增高。?

（2）分子雜交技術——Northern雜交和RNA原位雜交：互補的核苷酸序列通過?Walson-Crick堿基配對形成穩定的雜合雙鏈分子DNA分子的過程稱為雜交。雜交過程是高度特異性的，可以根據所使用的探針對已知序列進行特異性的靶序列檢測。分子雜交技術具有很高的靈敏度和高度的特異性，因而該技術在分子生物學領域中已廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。但其操作步驟繁瑣，且技術要求較高；同時該技術通量低，一次只能檢測一個目的基因。?

（3）基因芯片法：基因芯片是通過微加工技術，將數以萬計，乃至百萬計的特定序列的DNA片段（基因探針），有規律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，構成的一個二維DNA探針陣列，利用這類芯片與標記的生物樣品進行雜交，可對樣品的基因表達譜生物信息進行快速定性和定量分析?；蛐酒ǖ膬烖c是：1)高通量并行檢測：當一個樣品同時需要檢測多個基因表達水平時，一次實驗即可得出全部結果；2)操作簡便快速：整個檢測只需4-8小時基本可以出結果。但也存在如下缺點：1)成本較高：每個樣品需要一個芯片，成本大于￥1000/樣品，不利于大規模推廣；探針的合成與固定比較復雜，特別是制作高密度的探針陣列，是主要的限速步驟；2)不能精確定量，重復性差；3)靈敏度較低且需核酸量較大，另外由于芯片的種類較多，難以制定一個統一的質量控制標準。?

（4）轉錄組測序：轉錄組（transcriptome）廣義上指某一生理條件下，細胞內所有轉錄產物的集合，包括信使RNA、核糖體RNA、轉運RNA及非編碼RNA；狹義上指所有mRNA的集合。轉錄組測序一般是對用多聚胸腺嘧啶（oligo-dT）進行親和純化的RNA聚合酶II轉錄生成的成熟mRNA和ncRNA進行高通量測序。全面快速地獲取某一物種特定器官或組織在某一狀態下的幾乎所有轉錄本，反映出它們的表達水平。相對于傳統的芯片雜交平臺，轉錄組測序無需預先針對已知序列設計探針，即可對任意物種的整體轉錄活動進行檢測，提供更精確的數字化信號，更高的檢測通量以及更廣泛的檢測范圍，是目前深入研究轉錄組復雜性的強大工具。隨著測序技術的不斷進步，測序通量越來越大，但其成本一直居高不下，普通病人無法承受，且測序的操作復雜，周期較長，目前暫不適用于臨床醫療。?