[發(fā)明專利]負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310031905.0
• 申請日: 2013-01-28
• 公開（公告）號: CN103100109A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭瑞;張淵明;藍(lán)詠
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號: A61L15/44
• 分類號: A61L15/44;A61L27/54;A61L31/16
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于高分子材料技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架及其制備方法。

背景技術(shù)

絲素蛋白是蠶絲脫膠后得到的天然高分子纖維蛋白，是一種疏水性的蛋白質(zhì)，具有良好的生物相容性，而且來源豐富，成本低廉，是一種優(yōu)良的天然的高分子材料。

絲素蛋白，由于其優(yōu)異的力學(xué)性能、良好的韌性，熱穩(wěn)定性、高透氧性和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，特別是其三維多孔支架的形態(tài)，一直以來被廣泛運(yùn)用在組織工程領(lǐng)域上，例如軟骨修復(fù)、網(wǎng)狀結(jié)締組織修復(fù)、骨修復(fù)和神經(jīng)修復(fù)等方面。絲素具有獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)、良好的生物相容性以及良好的加工性能，可加工成粉體、凝膠、微球、多孔支架、納米纖維和膜，用于人工器官及其他復(fù)合材料的研制，具有廣泛的應(yīng)用前景。

明膠，膠原的衍生物，具有良好的生物相容性，例如能夠被人體完全吸收，沒有抗原性，已經(jīng)廣泛被運(yùn)用在生物醫(yī)學(xué)和藥物載體等方面上，而且經(jīng)臨床研究證明，膠原具有生物安全性。膠原的結(jié)構(gòu)上具有一系列的官能團(tuán)，例如氨基酸，因此能夠用在骨修復(fù)，或者通過一系列的化學(xué)改性方法，對其進(jìn)行改性。但是膠原的力學(xué)性能差，從而限制了其在生物醫(yī)學(xué)上的使用。

萬古霉素，窄譜性抗生素，對其它抗菌藥耐藥或療效差的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腸球菌特別有效。但是由于萬古霉素一般通過靜脈給藥的方式，長時間的腸胃外投藥，將對引起嘔吐、耳毒性、腎毒性等不良反應(yīng)。

近年來，利用絲素蛋白作為三維支架，在組織工程和藥物載體上的應(yīng)用和研究成為了熱點(diǎn)；而明膠早已廣泛利用在生物醫(yī)學(xué)和藥物載體上；另一方面，如何改善萬古霉素在人體的投藥方式和達(dá)到緩釋的效果，也是研究人員所關(guān)注的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架的制備方法。該方法將萬古霉素與明膠微球復(fù)合后負(fù)載在絲素蛋白多孔支架上，能達(dá)到緩釋藥物、延長藥效的作用，降低了萬古霉素對人體的傷害，抗菌效果明顯。

本發(fā)明的另一目的在于提供由上述制備方法得到的負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架。

本發(fā)明的再一目的在于提供所述的負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架的制備方法，包括如下步驟：

（1）將10～50mg/ml萬古霉素溶液加到明膠微球中，于4～25℃放置過夜后冷凍干燥，得到萬古霉素/明膠微球復(fù)合物；每克明膠微球加入萬古霉素溶液2～10ml；

（2）將步驟（1）的萬古霉素/明膠微球復(fù)合物加入2～10wt%絲素蛋白溶液中，攪拌均勻，冷凍干燥，得到負(fù)載萬古霉素/明膠微球的絲素蛋白復(fù)合支架；每毫升絲素蛋白溶液加入5mg萬古霉素/明膠微球復(fù)合物；

步驟（1）中：

所述的10～50mg/ml萬古霉素溶液優(yōu)選采用以下方法進(jìn)行制備：將萬古霉素溶于去離子水中，攪拌均勻，得到10～50mg/ml萬古霉素溶液；

所述的明膠微球優(yōu)選為多孔明膠微球；

所述的明膠微球的粒徑優(yōu)選為5～30μm，膨脹率優(yōu)選為400～500%；

所述的明膠微球優(yōu)選采用以下方法進(jìn)行制備：將0.1g山梨糖醇酐油酸酯（斯盤-80，Span80）加到盛有80ml植物油的燒瓶中，于60℃攪拌0.5～5h后加入10wt%明膠水溶液10ml，繼續(xù)攪拌180min后冰浴攪拌15min，然后加入25wt%戊二醛水溶液0.1ml，繼續(xù)攪拌2h，加入4℃丙酮40ml，攪拌15min，靜置，過濾，得到微球；將微球泡在10ml丙酮中，于4℃固化24h后用1mol/L氨基乙酸浸泡30min，離心，取沉淀，用丙酮和異丙酮洗滌的沉淀，將沉淀置于去離子水中浸泡過夜，冷凍干燥，得到明膠微球；

所述的攪拌的速度優(yōu)選為300～400r/min；

所述的離心的條件優(yōu)選為于25℃、10000r/min離心10min；

所述的冷凍干燥的條件優(yōu)選為-60℃冷凍干燥24h；

步驟（2）中：

所述的2～10wt%絲素蛋白溶液優(yōu)選采用以下方法進(jìn)行制備：將蠶繭加入100℃0.2wt%NaCO3水溶液中煮2h，100ml0.2wt%NaCO3水溶液加入1g蠶繭，脫膠后用去離子水清洗絲素至中性，于60℃烘干，得到絲素蛋白；取絲素蛋白，加入9.8mol/L溴化鋰水溶液中，40～60℃水浴加熱3～5h后用去離子水透析2～4天，離心，得到2～10wt%絲素蛋白溶液；