[發明專利]一種同步檢測二十三種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310031419.9
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103074448A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 吳勇;黃迎彬;南麗
• 申請（專利權）人: 海爾施生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/04;C12R1/93;C12R1/36;C12R1/21;C12R1/44;C12R1/46;C12R1/19;C12R1/35;C12R1/90;C12R1/01
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技術領域

本發明涉及一種腦炎腦膜炎病原體的檢測試劑盒及其檢測方法，尤其是涉及一種基于GeXP多重基因表達遺傳分析系統的同步檢測二十三種腦炎腦膜炎病原體的試劑盒及其檢測方法。

背景技術

腦炎腦膜炎（brain?fever;meningitis）是一種嬌嫩的腦膜或腦脊膜（頭骨與大腦之間的一層膜）被感染的疾病。此病通常伴有細菌或病毒感染身體任何一部分的并發癥，比如耳部、竇或上呼吸道感染。造成腦炎腦膜炎的病原體多種多樣，且病變范圍、程度相差懸殊，臨床表現十分復雜。臨床上現行的診斷手段如腦電圖、影像學、病原培養、血清學檢查等手段不能夠快速、準確的鑒別各種病原體，延誤治療，造成其死亡率居高不下，或有嚴重后遺癥，故急需一種高效的腦炎腦膜炎病原體診斷方法。

目前，腦炎腦膜炎病原體的傳統檢測方法主要包括以下幾種：

（1）病原體檢查：即直接做影像及活組織檢查，或病原體分離培養，之后在顯微鏡、電鏡下觀察，做出診斷。優點：成本低；對實驗室硬件要求低。但也存在如下缺點：1）耗時長：一般需3-5天或更長；2）對腦炎患者取腦組織進行活檢難以被患者和家屬接受；3）診斷效率低：有些病毒無法或極難培養，不同病毒需要不同的分離方法,一般醫院很難開展,達不到診斷目的,嚴重滯后于臨床治療。

（2）腦電圖：腦電圖是通過腦電圖描記儀將腦自身微弱的生物電放大記錄成為一種曲線圖，以協助診斷腦炎的方法。致腦炎病原體常選擇性地侵犯額葉、顳葉、頂葉，導致腦組織水腫、軟化及出血性壞死，產生異常放電可由腦電圖讀出。優點是在病原學檢測有難度的地方醫院，臨床只能結合當地感染疫情以及其他綜合輔助檢查并依靠腦電圖對神經、精神系統疾病進行診斷。但是也存在無法確診是否感染腦炎的缺點。

（3）影像學檢查：通過物理方法使腦組織內部結構形成影像，從而了解腦組織生理功能狀況以及病理變化，以達到診斷的目的，如MRI、CT、PET-CT等。優點是可用于檢測腦炎時腦組織的變化。缺點是無法確診是否感染性腦炎腦膜炎。

（4）免疫學檢查：應用最廣泛的是酶聯免疫技術（ELISA）：一般先用一抗與抗原發生特異性結合，然后用通用的酶標記的二抗與一抗發生特異性結合，再將酶顯色，之后觀察結果。優點：1）樣品通量較高：利用96孔酶標板，一塊平板可完成多個樣品的檢測；2）較敏感：利用酶聯的特性，可將原來的抗原信號放大；3）快捷：在時間上，比傳統的培養基微生物培養檢查法要縮短很多。但存在如下缺點：1）易出現假陽性：由于洗滌和抗原包被的操作，或由于抗原表面決定簇類似而發生交叉反應，故易出現假陽性；2）耗時耗力：制作抗體是非常耗時耗力的工作；3）靈敏度不確定：實驗的靈敏度取決于抗體的好壞，而每個抗體的好壞不一，質量難以控制；4）無法檢測變異的病毒。

（5）腦脊液（CSF）細胞學檢查：中樞神經系統（CNS）感染可發現腦脊液（CSF）的細胞總數增多和細胞學異常,但不同的CNS感染和不同時期的CSF細胞學異常亦不同。優點是對確診病毒腦炎極為重要的依據之一，是化膿性、結核性、病毒性和霉菌性腦膜炎的常規檢查之一，有時還可提供病原學診斷；但是也存在對病原體的種類不能確定的缺點。

（6）血液或腦脊液（CSF）的分子生物學-PCR檢測方法：目前經常應用的有實時熒光定量PCR、免疫PCR、反轉錄PCR等，都是針對病原體的特異性靶基因進行檢測。其中，熒光定量PCR檢測方法最為成熟。優點是：1）靈敏性高，并可精確定量；2）快速：一般24小時內可得到結果。但也存在如下缺點：1）通量低：一次只能檢測一個病原成分，如需要檢測多種病原體，就需要多臺PCR儀同時工作，效率低，周期長，對大批量的多種病原污染的樣品更是無從下手；2）成本相對較高：因一次只能檢測一個病原體，當一個樣品同時需要檢測多種病原時，必須一個一個檢測，成本相對增高。