[發(fā)明專利]牛體外胚胎兩段培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310029451.3
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103103160A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設計）人: 賈振偉;張顯華;張穎
• 申請（專利權）人: 內(nèi)蒙古民族大學
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 北京瑞思知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11341
• 代理人: 王加嶺

1.牛體外胚胎兩段培養(yǎng)方法，該方法首先將牛受精卵在含0.12～0.16mM葡萄糖的SOF液中培養(yǎng)2～3天，然后在含1.8～2.2mM葡萄糖的SOF液中培養(yǎng)4～5天。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，該方法首先將牛受精卵在含0.15mM葡萄糖的SOF液中培養(yǎng)2天，然后在含2mM葡萄糖的SOF液中培養(yǎng)5天。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于，培養(yǎng)條件均為含5%CO₂的空氣，溫度39℃，飽和濕度。

4.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于，該方法還包括在牛受精卵培養(yǎng)前進行牛卵母細胞體外成熟和體外受精的步驟。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，卵母細胞體外成熟的方法是：將挑選出的A、B級卵丘卵母細胞復合體在洗卵液中清洗3次，成熟液清洗2次，然后放入預先在CO₂培養(yǎng)箱中平衡2h以上的成熟培養(yǎng)液中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為含5%CO₂的空氣，溫度39℃，飽和濕度，培養(yǎng)時間為24h。

6.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，體外受精的方法是：采用培養(yǎng)皿微滴法，首先將成熟的卵母細胞在受精液中清洗2-3次后放入平衡好的受精液中；然后采用上浮法處理冷凍精液，精子在洗精液上浮20-30min，然后取上清600-800μl放入1.5ml離心管離心2次，離心后除去上清加入洗精液最終體積為250μl，取50μl處理后的精液加入已放入卵母細胞的受精液中，精子終濃度為1×10⁶精子/ml，培養(yǎng)條件為5%CO₂的空氣，溫度39℃，飽和濕度，受精時間為8h。

7.一種用于牛體外胚胎培養(yǎng)的試劑，其包括A液：含0.12～0.16mM葡萄糖的SOF液；和，B液：1.8～2.2mM葡萄糖的SOF液。

8.根據(jù)權利要求7所述的試劑，其特征在于，所述A液為含0.15mM葡萄糖的SOF液。

9.根據(jù)權利要求7或8所述的試劑，其特征在于，所述B液為含2mM葡萄糖的SOF液。