[發明專利]一種綿羊肺炎支原體的快速定性檢測方法

無效

• 申請號: 201310028952.X
• 申請日: 2013-01-25
• 公開（公告）號: CN103103273A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 岳華;湯承;楊發龍
• 申請（專利權）人: 西南民族大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及動物傳染病診斷，具體涉及檢測綿羊肺炎支原體的PCR方法技術領域。

背景技術

綿羊肺炎支原體可引起綿羊及山羊發生非典型肺炎。臨床上以咳嗽、流鼻涕、漸進性消瘦和增生性間質性肺炎為主要特征（[1]?Besser?T?E,Cassirer?E?F,Potter?K?A,?et?al.?Association?of?Mycoplasma?ovipneumoniae?infection?with?population-limiting?respiratory?disease?in?free-ranging?Rocky?Mountain?bighorn?sheep?(?Ovis?Canadensis?canadensis).J?Clin?Microbiol,2008,4?6:423～430.?[2]?Parham?K,Churchward?C?P,McAuliffe?L,?et?al.?A?high?level?of?strain?variation?within?Mycoplasma?ovipneumoniae?population?of?the?UK?has?implications?for?disease?diagnosis?and?management.?Vet?Microbiol,2006,118:83～90.）。目前綿羊肺炎支原體在全球范圍內分布，在我國流行十分廣泛，給養羊業生產造成了巨大的經濟損失（[3]?Patel?H,?Mackintosh?D,?Ayling?RD,?et?al.?A?novel?medium?devoid?of?ruminant?peptone?for?high?yield?growth?of?Mycoplasma?ovipneumoniae.?Vet?Microbiol,?2008,127(3～4):309～314.[4]?王華，楊發龍，王永，湯承.?四川省山羊支原體性肺炎流行病學調查,?中國畜牧獸醫，2011,?38(1):?210-213.）。迄今為止，有關綿羊肺炎支原體的病原學診斷集中在病原的分離鑒定和聚合酶鏈式反應(PCR)等方面。由于支原體生長的營養需求較高，且生長較為緩慢，給病原的分離鑒定帶來困難。隨著現代分子生物學的飛速發展，?PCR方法因其具有快速、特異、靈敏的優勢，已成為檢測病原的常規技術手段，但長期以來由于綿羊肺炎支原體基因序列的缺乏,?目前綿羊肺炎支原體的分子檢測方法只有?McAuliffe?L根據16S?rRNA建立的PCR方法的報道（[5]?McAuliffe?L,?Hatchell?FM,?Ayling?RD,et?al.?Detection?of?Mycoplasma?ovipneumoni?ae?in?Pasteurella-?vaccinated?sheep?flocks?with?respiratory?disease?in?England.?Vet?Rec,2003,?153(22):687～688.），該方法具有較好的特異性，但在實際應用于臨床樣本檢測時發現靈敏性不高。另外，大量研究表明綿羊肺炎支原體在核酸水平和蛋白水平均存在高度的異質性，并且其基因組中G+C含量低，因此給分子檢測靶點的選擇造成很大困難（[6]?Ionas?G,?Norman?NG,?Clarke?JK,?Marshall?RB.?A?study?of?the?heterogeneity?of?isolates?of?Mycoplasma?ovipneumoniae?from?sheep?in?New?Zealand.?Vet?Microbiol.?1991?Nov;29(3-4):339-47;[7]?Parham?K,?Churchward?CP,?McAuliffe?L,?Nicholas?RA,?Ayling?RD.?A?high?level?of?strain?variation?within?the?Mycoplasma?ovipneumoniae?population?of?the?UK?has?implications?for?disease?diagnosis?and?management.?Vet?Microbiol.?2006?Nov?26;118(1-2):83-90.）。