[發(fā)明專利]一種RNA及其在心血管系統(tǒng)疾病中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310027785.7
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103114087A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設計）人: 李子健;張幼怡;邢瑞;楊承志;呂志珍
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學第三醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/861;C12N5/10;C12N7/01;A61K48/00;A61K45/00;A61P9/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領域，尤其涉及一種RNA及其在心血管系統(tǒng)疾病中的應用。

背景技術(shù)

HIP-55(hematopoietic?progenitor?kinase?1[HPK1]-interacting?protein?of?55?kDa；也稱為drebrin-like?protein、mAbp1或SH3P7)是一個包含多功能域的蛋白質(zhì)。其結(jié)構(gòu)主要包含著N端的F-actin蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域和C端SH3結(jié)構(gòu)域。HIP-55參與突觸發(fā)生、受體內(nèi)吞、骨架重排及信號轉(zhuǎn)導。目前對HIP-55功能了解較少尚無對HIP-55在心血管系統(tǒng)方面的研究報道。

心血管疾病是中國居民健康的“頭號殺手”，每年主要用于心血管病的直接醫(yī)療費用已達1300億元人民幣。心肌纖維化是心臟重塑的重要病理改變，是指在心肌的正常組織結(jié)構(gòu)中心肌成纖維細胞過度分裂，膠原纖維過量積聚、心臟組織中膠原濃度顯著升高或膠原成分發(fā)生改變，引起心肌僵硬度增加、舒縮功能受限，嚴重影響心臟的功能。這種病理變化在多種心血管疾病中存在，與心律失常、心功能障礙甚至心臟性猝死密切相關(guān)。心肌纖維化是心功能由代償期向失代償期轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵，其嚴重程度和疾病的發(fā)生發(fā)展及預后密切相關(guān)。因此，預防和逆轉(zhuǎn)心肌纖維化具有重要的意義。大量研究表明兒茶酚胺-腎上腺素系統(tǒng)過度激活是促心肌纖維化的重要因素，兒茶酚胺（如異丙腎上腺素isoproteronol,Iso)通過β-ARs促進心肌成纖維細胞增殖和膠原合成增加，從而導致心肌纖維化、心臟功能的惡化和心衰的形成。同時β-ARs阻滯劑能夠顯著改善患者的預后。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種RNA及其在心血管系統(tǒng)疾病中的應用。

本發(fā)明提供的RNA，其核苷酸序列為序列表中序列3。

編碼上述RNA的基因也是本發(fā)明保護的范圍。

上述RNA的基因的核苷酸序列為序列表中序列4。

含有上述基因的重組載體、轉(zhuǎn)基因細胞系或重組腺病毒也是本發(fā)明保護的范圍。

上述重組載體為重組腺病毒載體；所述重組腺病毒載體具體為將上述的基因?qū)胂俨《据d體中，得到表達RNA的重組腺病毒載體。

上述腺病毒載體為pAd/PL-Dest，上述重組腺病毒載體具體為將編碼上述RNA的基因（序列4）插入pAd/PL-Dest中得到的載體，將該質(zhì)粒命名為shpAd-HIP-55

HIP-55蛋白抑制劑在制備具有如下1）和/或2）功能的產(chǎn)品中的應用也是本發(fā)明保護的范圍：

1）促進心臟成纖維細胞增殖；

2）提高P38MAPK激酶活性；

所述HIP-55蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

上述促進心臟成纖維細胞增殖具體通過如下1）或2）體現(xiàn)：

1）在ISO誘導下增加心臟成纖維細胞Brdu參入量；

2）在ISO誘導增加心臟成纖維細胞CCK8吸光值。

上述提高P38MAPK激酶（為兩種亞型，其氨基酸序列為序列表中的序列8或序列9）活性通過提高P38MAPK激酶底物ATF-2的磷酸化水平。

上述應用中，所述HIP-55蛋白抑制劑為上述RNA、上述基因或上述重組載體、轉(zhuǎn)基因細胞系或重組腺病毒。

上述應用中，所述產(chǎn)品為藥物。

上述應用中，所述心臟成纖維細胞為離體心臟成纖維細胞。

HIP-55蛋白在篩選、開發(fā)和/或設計具有如下1）和/或2）功能的產(chǎn)品中的應用也是本發(fā)明保護的范圍：1）抑制心臟成纖維細胞增殖；2）抑制P38MAPK激酶活性；所述HIP-55蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

本發(fā)明的實驗證明，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)經(jīng)異丙腎上腺素（ISO）誘導，在乳大鼠心肌成纖維細胞中過表達HIP-55明顯抑制心臟成纖維細胞增殖，與之相反，應用RNAi方法knock?down?HIP-55明顯促進心臟成纖維細胞增殖；在過表達HIP-55心臟成纖維細胞中能夠抑制ISO誘導的P38MAPK的激活以及激酶活性，而在Knock-down?HIP-55心肌成纖維細胞中能夠增強ISO誘導的P38MAPK的激活以及激酶活性；發(fā)現(xiàn)HIP-55是一種新的對心臟纖維化具有保護作用的蛋白質(zhì)，為臨床診斷、治療及新藥開發(fā)提供了新的靶點。

附圖說明

圖1為過表達HIP-55蛋白質(zhì)表達水平的檢測

A為攜帶Dserd-HIP-55基因腺病毒及攜帶Dserd基因的對照腺病毒轉(zhuǎn)染效率的檢測；B為過表達HIP-55蛋白質(zhì)表達水平的檢測