[發明專利]一種灰葡萄孢特異性PCR檢測方法

無效

• 申請號: 201310027722.1
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103146812A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 張靜;范璇;李國慶;楊龍
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種灰葡萄孢特異性PCR檢測方法，其步驟為：

1）CTAB法提取樣品真菌菌絲基因組DNA；

2）PCR法擴增，PCR反應體系具體為：樣品基因組DNA?1μL；10×PCR?buffer?2.5μL；2.5mM?dNTP?Mixture?0.5μL；5U/μL?rTaq酶0.25μL；一對20μM引物分別0.5μL；ddH₂O?19.75μL；總體系25μL；PCR反應程序具體為：94℃預變性5min；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min，27個循環；72℃延伸10min；降溫至16℃維持5min；

所述引物對為：

B1SE11f：5’–CAGGAAACACTTTTGGGGATA–3’；

B1SE11r：5’–GAGGGACAAGAAAATCGACTAA–3’?；

3）凝膠電泳檢測擴增產物，EB染色觀察，在327bp處存在單一擴增條帶表明樣品中含灰葡萄孢。