[發明專利]尿微量白蛋白檢測方法、系統和試劑盒

有效

• 申請號: 201310027507.1
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103115904A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 孫紅霞;唐亞林;楊千帆;管愛嬌
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 郭放;王磊

1.一種檢測溶液中尿微量白蛋白濃度的方法，所述方法包括以下步驟：

（1）用pH5.0～8.2的含有鉀離子或鈉離子的緩沖溶液、尿微量白蛋白和菁染料配制尿微量白蛋白濃度不同的多個溶液樣本，其中每個所述溶液樣本中含有相同濃度的菁染料；

（2）將所述多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，采用540至570nm的激發波長，檢測采集波長處的熒光強度值；

（3）以各個所述溶液樣本的尿微量白蛋白濃度作為橫坐標或縱坐標，以步驟（2）中測得的各溶液樣本在采集波長處的熒光強度值為縱坐標或橫坐標作圖，從而獲得尿微量白蛋白濃度的標準曲線；

（4）在待測液體樣品中加入菁染料、含有鉀離子或鈉離子的緩沖溶液，以使待測液體樣品中的菁染料的濃度以及pH值與步驟（1）中的溶液樣本一致，從而得到測試溶液，并記錄待測液體樣品被稀釋的比例；

（5）將步驟（4）中獲得的測試溶液置于熒光光譜儀下，采用與步驟（2）相同的激發波長，檢測所述采集波長處的熒光強度值；

（6）利用步驟（5）中測得熒光強度值在步驟（3）中獲得的尿微量白蛋白濃度標準曲線中找到對應的測試溶液的尿微量白蛋白濃度值，然后通過待測樣品被的稀釋比例計算出待測樣品的尿微量白蛋白濃度；

其中所述采集波長在550nm至650nm的范圍。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述菁染料為式I的化合物，

??????????式I

其中：R₁為C₁-C₆的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自H或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環結構，或者R₄和R₅與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環結構；R₆和R₇為C₁-C₆烷基或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；Y為反離子，根據R₆和R₇所帶電荷的不同而不同，若R₆和R₇為烷基，則Y為鹵素陰離子；若R₆和R₇只有一個帶有磺酸根，則無需Y作為反離子；若R₆和R₇均帶有磺酸根，則Y為三乙胺陽離子；X₁，X₂獨立地選自C、O、S、Se或Te。

3.如權利要求2所述的方法，其中所述C₁-C₆的烷基選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。

4.如權利要求2所述的方法，其中R1選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基、異己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。

5.如權利要求2所述的方法，其中所述5元至7元環結構為含有或不含有N或S原子的飽和或不飽和環結構。

6.如權利要求2所述的方法，其中Y選自氟、氯、溴、碘陰離子或三乙胺陽離子。

7.如權利要求2所述的方法，其中所述含有鉀離子或鈉離子的緩沖液選自添加有水溶性鉀鹽或鈉鹽的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、三乙醇胺緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、雙甘氨肽緩沖液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液、磷酸鉀-磷酸氫鉀緩沖液、磷酸鈉-磷酸氫鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、巴比妥鉀-鹽酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鉀緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、硼砂-氫氧化鈉緩沖液、磷酸鈉緩沖液；所述緩沖液中緩沖劑的濃度在1～50mmol/L范圍。