[發明專利]一種家蠶病原微孢子蟲LAMP可視化快速檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310026870.1
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103131773A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 劉吉平;楊吉龍
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/90
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明涉及生物技術領域，更為具體地，涉及一種家蠶病原微孢子蟲LAMP可視化快速檢測試劑盒及其檢測方法。?

背景技術

微孢子蟲（Microsporidia）是一類專性細胞內寄生的單細胞真核生物。由家蠶病原微孢子蟲寄生家蠶引起的家蠶微粒子病，是蠶桑生產上危害嚴重而又長期得不到根治的傳染性疫病，并嚴重制約著蠶絲業的健康穩定的發展。19世紀中葉曾因該病的蔓延，給歐洲的蠶絲業帶來了毀滅性的破壞；上個世紀初家蠶微粒子病也給中國、日本、印度等養蠶國帶來了極大地危害。自Nageli首次發現家蠶微孢子蟲以來，世界各地又陸續從家蠶體內分離出多種不同種屬的微孢子蟲（汪忠康.?家蠶異形微孢子蟲與交叉傳染.?江蘇蠶業,2001,(2):19-21；Takeshi?Kawarabata.?Biology?of?microsporidians?Infecting?the?Silkworm,?Bombyx?mori,?in?Japan.?Journal?of?Insect?Biotechnology?and?Sericology,?2003,?72:?1-32）。且研究發現，其它昆蟲來源的微孢子蟲如菜粉蝶微孢子蟲、斜紋夜蛾微孢子蟲、桑尺蠖微孢子蟲等也能感染家蠶（黃旭華,朱方容,劉吉平等.?廣西菜粉蝶微孢子蟲對家蠶的病原性研究.?廣西農業科學,2009,40(4):415-419；廖模祥,劉吉平,郝娟等.2種野外昆蟲來源微孢子蟲的超微結構及生活史觀察.中國蠶業,2011,(1):17-20），說明野外昆蟲微粒子病的傳染也是造成家蠶微粒子病的一個重要因素（吉英.?2010.補正檢查出微孢子蟲與原種跟蹤調查探討.?四川蠶業,38(2):58-60）。因此，開展對家蠶病原微孢子蟲的快速診斷及對其進行種屬特異性鑒別，將為系統預防和控制家蠶微粒子病提供重要依據。但由于家蠶病原微孢子蟲來源的復雜性、存在種屬基因多樣性和生態多樣性，使微孢子蟲的檢測和鑒別一直成為蠶業研究的重點和難點。近年來我國原種超毒淘汰的比例逐年增加的趨勢相對明顯。大體上，每生產1萬張原種，因檢測出家蠶微孢子蟲而淘汰近1000張，而剩余的帶毒合格的和無毒合格的基本各占50%，直接經濟損失達上千萬元，且這個比例還是發生在條件和技術相對較好的桑蠶原種場內（中國農業科學院蠶業研究所,全國桑蠶微粒子病發生情況調研資料匯編，2010）。因此開展對家蠶病原微孢子蟲的快速診斷技術研究，為系統預防和控制家蠶微粒子病提供重要技術依據，提高蠶種檢疫的質量，對家蠶微粒子病的防治具有重要的科學意義。?

目前國內外蠶種生產環節的檢測檢疫工作主要是針對家蠶微粒子病病原微孢子蟲的檢驗，世界各養蠶國家均將家蠶微粒子病列為檢疫對象。目前實驗室中已經建立的新檢測方法有：顯微鏡鏡檢法（王玉強.柞蠶微孢子蟲浸染甜菜夜蛾的生物學特性研究,華南農業大學碩士學位論文.2009；劉吉平,曾玲.Calcofluor?White?M2R?熒光染色法識別家蠶微孢子蟲.昆蟲學報,2007,50(11):1185-1186）、免疫學檢測法（梅玲玲,金偉.?SPA-協同凝集反應快速鑒別微孢子蟲孢子的研究.蠶業科學,1988,2:110-111；劉吉平,盧鏗明,徐興耀等.?單抗免疫金銀染色法診斷家蠶微孢子蟲的研究.?廣東蠶業,1995,29(3):30-35；李艷紅,謝儷,潘國慶等,?家蠶微孢子蟲抗體免疫熒光檢測方法的建立及應用.?西南農業大學學報.2006,28(6):990-993）、PCR技術（劉吉平,曹陽,Smith?J.E等.?模擬感染家蠶微粒子病的PCR分子診斷技術研究.?中國農業科學,2004,37(12):?1925-1931）、核酸分子雜交方法（蔡平鐘,邱寶利,周鵬.?PCR和核酸雜交檢測家蠶微孢子蟲的研究(摘報).?四川蠶業,2000,28(4):15）等。但是，上述檢測方法均都存在耗時費力、特異性不強且不適于野外檢測等缺點，不利于實際生產上廣泛地推廣和使用。?