[發明專利]六月青多糖的制備及其抗乙肝病毒的作用

在審

• 申請號: 201310025301.5
• 申請日: 2013-01-24
• 公開（公告）號: CN103965367A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發明（設計）人: 黃仁彬;張士軍;羅秀;葛文漪;何巧玲;蒙明瑜;李映新;吳咖;黃莎
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P1/16;A61P31/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及以六月青多糖作為有效成份的純天然藥物制劑，以及其在治療乙型肝炎、急慢性肝損傷、抗腫瘤，提高機體免疫力。

背景技術

六月青(LYQ)，系爵床科(Acanthaceae)植物肖雞籠(頂頭馬蘭)Taraphochlamys affinis(Griff)Bremekhu(Strobilanthes affinis(griff)Y.C.Tang)的干燥地上部分。是廣西民間用于治療急慢性肝損傷、乙型肝炎、黃疸等的常用草藥。申請者對該藥進行了大量的研究，體內實驗發現，本品對四氯化碳(CCl₄)等所致大鼠急性化學性肝損傷均有保護作用，能明顯降低丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)的活性；能增加免疫抑制小鼠的胸腺重量，提高血清溶菌酶、腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量；能增加S180荷瘤小鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細胞介素(IL-2)含量，抑制S180荷瘤小鼠的腫瘤生長。體外試驗亦表明：本品可降低HepG2.2.15細胞培養上清中的HBsAg、HBeAg含量，可抑制HBV-DNA的復制。六月青對急慢性肝損傷、乙型肝炎，黃疸的治療有較大的潛在應用價值。本研究是對廣西民族特色藥材進行挖掘整理，將為廣西民族草藥的深度開發提供新思路，對促進廣西中草藥產業現代化具有重大意義。

目前，尚未發現有把六月青多糖片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑等應用于臨床的報告。

發明內容

本發明的目的是把六月青多糖制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑，應用于急慢性肝損傷、乙型肝炎，腫瘤的治療。

技術方案：

1、六月青多糖的提取：六月青干燥粗粉，加10倍量水，煮3次，每次2h，收集水煮液，濃縮成稠膏，于60℃真空干燥烘箱中烘干，得粉末。

2、制劑的制備：六月青多糖加入適當輔料制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑。

3、六月青多糖片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑對肝癌細胞HepG2.2.15細胞的影響：采用MTT法測定六月青片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑對HepG2.2.15細胞毒性，ELISA法測定細胞培養上清中的HBsAg、HBeAg，測定六月青片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑的半數中毒濃度(TC₅₀)、半數抑制濃度(IC₅₀)。采用PCR體外擴增法定量檢測各活性部位對HepG2.2.15細胞HBV-DNA的拷貝數和循環數(CT)的影響。

具體實施方式

1、六月青多糖的制備：取1000g六月青干燥粗粉，加10L水，煮3次，每次2h，合并水提液，過濾，濾液濃縮后加入6倍量95％乙醇醇沉24h，回收乙醇，濃縮濾液，60℃烘箱真空干燥，得褐色粉狀多糖。加入相應輔料制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑。

藥效學研究

對HepG2.2.15細胞的影響

對HepG2.2.15細胞進行細胞分泌動力學實驗，以確定加入受度藥物時間和周期；采用MTT法測定六月青多糖片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑對HepG2.2.15細胞毒性，ELISA法測定細胞培養上清中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)，測定其TC₅₀、IC₅₀；并采用PCR體外擴增法定量檢測HepG2.2.15細胞培養上清中HBV-DNA的拷貝數和循環數(CT)。結果發現，六月青多糖片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑可降低HBV-DNA的拷貝數和循環數。顯示六月青多糖對HBV-DNA的復制有抑制作用。結果見下表1、2、3：

表1六月青多糖對HepG2.2.15細胞的細胞毒作用：(n＝6)

表2六月青多糖對HepG2.2.15細胞的影響：

表3六月青多糖對HepG2.2.15細胞HBV-DNA的影響：(n＝3)

注：與空白對照組比較，^*P＜0.05，^**P＜0.01

實施例：

1、六月青多糖的提取及其制劑的制備：

1.1六月青多糖的制備：取六月青干燥粗粉10kg，加100L水，煮3次，每次2h，過濾，收集水煮液，濃縮成比重為1.3的稠膏，于60℃真空干燥烘箱中烘干，得粉末。