[發(fā)明專利]一種百草婦炎清栓指紋圖譜的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310024010.4
• 申請日: 2013-01-23
• 公開（公告）號: CN103175909A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設計）人: 高秀麗;孟小夏;王鵬嬌;姜楠
• 申請（專利權）人: 貴州長生藥業(yè)有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

1.一種百草婦炎清栓指紋圖譜的建立方法，其特征在于，方法如下：

(1)對照品溶液的制備：稱取苦參堿2～10mg、槐果堿2～10mg，置于5-20ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得苦參堿、槐果堿的混合對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：稱取百草婦炎清栓樣品2～10g，置水浴上使熔化，加0.15-0.6ml氨水，加硅藻土5-20g，研勻，加氯仿25-100ml，超聲15-60min，補重，過濾，取濾液10-40ml，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至5-20ml，過0.2-0.8μm微孔濾膜，作為供試品溶液；

(3)百草婦炎清栓指紋圖譜的測定：吸取供試品溶液、對照品溶液各10～30μL，分別注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到色譜圖；

其中色譜條件為：色譜柱：250mm×4.6mm，5μm的Comatex?C18-AA柱；流動相：乙腈(A)-用磷酸調節(jié)pH為6-7的0.02-0.08％的三乙胺緩沖液(B)；梯度洗脫：0→100min，A的體積百分比10％→60％，流速0.5-2ml/min，檢測波長：210～230nm，柱溫：20～40℃，進樣量：10～30μL。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，方法如下：

(1)對照品溶液的制備：稱取苦參堿2～10mg、槐果堿2～10mg，置于10ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得苦參堿、槐果堿的混合對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：稱取百草婦炎清栓樣品2～10g，置水浴上使熔化，加0.3ml氨水，加硅藻土10g，研勻，加氯仿50ml，超聲30min，補重，過濾，取濾液20ml，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至10ml，過0.45μm微孔濾膜，作為供試品；

(3)百草婦炎清栓指紋圖譜的測定：吸取供試品溶液、對照品溶液各10～30μL，分別注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到色譜圖；

其中色譜條件為：250mm×4.6mm，5μm的Comatex?C18-AA柱；流動相：乙腈(A)-用磷酸調節(jié)pH為6-7的0.04％的三乙胺緩沖液(B)；梯度洗脫：0→100min，A的體積百分比10％→60％；流速1ml/min，檢測波長210～230nm，柱溫20～40℃，進樣量10～30μL。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，方法如下：

(1)對照品溶液的制備：稱取苦參堿4.08mg、槐果堿5.02mg，置于10ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得苦參堿0.408mg/ml、槐果堿0.502mg/ml的混合對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：精密稱取百草婦炎清栓樣品5g，置水浴上使熔化，加0.3ml氨水，加硅藻土10g，研勻，精密加氯仿50ml，超聲30min，補重，過濾，取濾液20ml，蒸干，殘渣用甲醇溶解并定容至10ml，過0.45μm微孔濾膜，作為供試品；

(3)百草婦炎清栓指紋圖譜的測定：精密吸取供試品溶液、對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，記錄80min的色譜圖；

其中色譜條件為：250mm×4.6mm，5μm的Comatex?C18-AA柱；流動相：乙腈(A)-用磷酸調節(jié)pH為6.5的0.04％的三乙胺緩沖液(B)；梯度洗脫：0→100min，A的體積百分比10％→60％；流速1ml/min，檢測波長220nm，柱溫30℃，進樣量20μL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜儀使用的檢測器為二極管陣列檢測器。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，色譜圖中2號峰為苦參堿，3號峰為槐果堿。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，色譜圖中共有13個共有峰。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，以2號峰作為參比峰計算，所述共有峰的相對保留時間分別為1號峰；0.371～0.390，2號峰：1.000，3號峰：1.162～1.242，4號峰：1.445～1.738，5號峰：1.718～1.992，6號峰：1.882～2.184，7號峰：2.248～2.606，8號峰：2.794～3.236，9號峰：2.997～3.472，10號峰：3.183～3.684，11號峰：3.561～4.123，12號峰：3.75～4.390，13號峰：3.934～4.601。