[發(fā)明專利]β-鏈蛋白及基因的應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310023750.6
• 申請(qǐng)日: 2013-01-22
• 公開（公告）號(hào): CN103060463A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 寧光;李峰;李小英;曹亞南;姜秀麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市內(nèi)分泌代謝病研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N33/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及β-鏈蛋白及基因在檢測(cè)胰島素瘤試劑和在胰島素瘤藥物篩選中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

胰島素瘤是最常見的功能性胰島細(xì)胞瘤，由Nicholis于1902年首先報(bào)道在尸檢中發(fā)現(xiàn)，其發(fā)病率約為1/25萬。胰島素瘤的病因尚不清楚，其典型表現(xiàn)為明顯的低血糖及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，由于發(fā)病率較低及社區(qū)醫(yī)生認(rèn)知有限，容易被誤診成各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病，包括癲癇、癔癥、精神障礙等。長期的低血糖可造成不可逆性的腦損害，引起智力減退、行為緩慢，嚴(yán)重者甚至生活不能自理，常給患者帶來很大危害。如果能及時(shí)、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出胰島細(xì)胞瘤，讓患者及時(shí)得到治療，將是患者的福音。

menin是抑癌基因MEN1的編碼產(chǎn)物，在進(jìn)化過程中高度保守。臨床上menin的變異可以直接導(dǎo)致多內(nèi)分泌腺瘤病1型（MEN1）的發(fā)生。盡管menin廣泛分布于各種組織，但正如MEN1病人或MEN1雜合性突變小鼠所表現(xiàn)的癥狀那樣，menin的缺失僅引起特定的組織器官發(fā)生病變，特別是內(nèi)分泌器官，表現(xiàn)了其高度的功能組織特異性。menin蛋白的晶體結(jié)構(gòu)類似于人半合的左手，拇指和其余手指圍合起來連同掌心一起形成一個(gè)深的袋形結(jié)構(gòu)，這個(gè)袋形結(jié)構(gòu)的底部就是menin的活性中心，用于結(jié)合JunD、MLL等效應(yīng)蛋白。雖然JunD和MLL結(jié)合的位點(diǎn)相同，但是menin對(duì)二者的調(diào)控作用卻完全相反，其中的機(jī)制尚不清楚。Menin可以與很多蛋白發(fā)生作用。這些蛋白廣泛地參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)，細(xì)胞分裂和DNA修復(fù)。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)，menin可以與β-鏈蛋白（β-catenin）結(jié)合并促使β-catenin出核。所以，本發(fā)明著重研究β-catenin是否在胰島細(xì)胞瘤的生成過程中發(fā)生作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是研究β-鏈蛋白（β-catenin）在小鼠胰島素瘤發(fā)生中所起的作用，為臨床上治療和檢測(cè)胰島素瘤提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

本發(fā)明涉及β-鏈蛋白基因在檢測(cè)胰島素瘤試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明涉及β-鏈蛋白基因在胰島素瘤藥物篩選中的應(yīng)用。

本發(fā)明涉及β-鏈蛋白在檢測(cè)胰島素瘤試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還涉β-鏈蛋白在胰島素瘤藥物篩選中的應(yīng)用。

腫瘤抑制基因Men1所編碼的蛋白稱為Menin，Men1條件性敲除小鼠(Men1^lox/lox-RipCre⁺，Menin-KO)正好提供了一個(gè)恰當(dāng)?shù)囊葝u素瘤發(fā)生模型，Menin-KO小鼠也可以發(fā)生與MEN1病人類似的腫瘤譜。實(shí)驗(yàn)中，在Menin-KO小鼠胰腺β細(xì)胞中進(jìn)一步敲除β-catenin（DBKO小鼠），然后觀察β-catenin的缺失是否能夠影響胰島素瘤的生成。

在為期兩年的生存率觀察中，發(fā)現(xiàn)DBKO小鼠的生存率相比Menin-KO小鼠得到了明顯提高。對(duì)Menin-KO小鼠和DBKO小鼠的死亡尸體進(jìn)行解剖，在胰腺中均發(fā)現(xiàn)肉眼可見的腫瘤，而Menin-KO小鼠的腫瘤體積明顯大于DBKO小鼠。腫瘤發(fā)生率的統(tǒng)計(jì)也表明Menin-KO小鼠的腫瘤發(fā)生率在各個(gè)觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)均高于DBKO小鼠，而在正常小鼠中沒有發(fā)現(xiàn)胰腺腫瘤，說明β-catenin與胰島素瘤成正關(guān)系，β-catenin一旦缺失，胰島細(xì)胞瘤的發(fā)生率將明顯降低。同時(shí)對(duì)各組轉(zhuǎn)基因小鼠及對(duì)照正常組小鼠進(jìn)行空腹血糖、隨機(jī)血糖、空腹胰島素水平進(jìn)行了測(cè)試，結(jié)果表明，Menin-KO小鼠的胰島β細(xì)胞胰島素分泌喪失了糖依賴性，在低血糖的狀態(tài)下仍然可以自主分泌胰島素。年齡大的Menin-KO小鼠一般表現(xiàn)為活動(dòng)明顯減小，對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍以及精神萎靡，符合低血糖的臨床表現(xiàn)。在Menin敲除的基礎(chǔ)上敲除β-catenin可以有效的逆轉(zhuǎn)胰島素瘤小鼠的低血糖，胰島素分泌在一定程度上恢復(fù)了糖依賴性，從而提高了生存率。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：1、本發(fā)明通過轉(zhuǎn)基因型小鼠的研究了，確定了β-catenin對(duì)胰島素瘤生長成正關(guān)系，能通過β-catenin的檢測(cè)，快速、準(zhǔn)確地對(duì)胰島素瘤小鼠確診。2、本發(fā)明為臨床上β-catenin在檢測(cè)胰島素瘤試劑中的應(yīng)用及在胰島素瘤藥物篩選中的應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為小鼠的生存率比較圖。

圖2為小鼠的腫瘤發(fā)生率統(tǒng)計(jì)圖。

圖3為胰腺腫瘤組織免疫組化染色對(duì)比圖。

圖4為小鼠空腹血糖測(cè)試對(duì)比圖。

圖5為小鼠隨機(jī)血糖測(cè)試對(duì)比圖。

圖6為10月齡的小鼠的空腹血清胰島素水平測(cè)試比較圖。