[發明專利]姜黃素在制備大電導鈣激活鉀通道開放劑中的用途

有效

• 申請號: 201310023700.8
• 申請日: 2013-01-22
• 公開（公告）號: CN103933020A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 張雪梅;彭文;陳啟菁;王云滿;付文成;王利;王浩
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: A61K31/12
• 分類號: A61K31/12;A61P13/10;A61P1/00;A61P35/00;A61P25/00
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬中藥領域，涉及中藥姜黃主要活性成分姜黃素的新的藥用用途，具體涉及姜黃素在制備鉀通道開放劑中的用途，尤其是姜黃素作為大電導鈣激活鉀通道開放劑的新用途。?

背景技術

研究報道，大電導鈣激活的鉀通道（BK通道）廣泛分布于各種類型的細胞中，尤其在平滑肌細胞、神經元和內分泌細胞等興奮性細胞中表達豐富。BK通道受膜電位和細胞內Ca²⁺濃度雙重調節，是細胞興奮性，肌肉收縮和遞質釋放等多種生理過程的強大調節器。有研究顯示，BK通道的激活、失活和變異與多種疾病調節有關，例如：作為血管平滑肌細胞膜上的優勢離子通道，BK通道的激活和表達增加能夠平衡高血壓時冠脈張力的上升，增強平滑肌細胞舒張功能適應性；在固有免疫中，阻斷BK通道使微生物殺傷和消化過程受到抑制；在若干種腫瘤的發生過程中，BK通道抑制腫瘤細胞增殖，影響其遷移，表現出抗腫瘤的特性，在神經系統中，激活的BK通道對神經細胞有保護作用。因此，BK通道是治療高血壓，腦中風，惡性腫瘤等許多疾病的潛在靶點。?

鑒于BK通道在人類生理、病理過程中的重要作用，尋找高活性、高選擇性、類藥性好的BK通道開放劑成為本領域研究的熱點。但是，目前對BK通道開放劑的研究大多還停留在早期藥物發現的階段，僅有4個開放劑進入臨床試驗的開放劑，而其中3個（NS8，BMS204352和TA1702）都因故被中止，只有Andolast還在試驗中。?

姜黃素是一種從草本植物姜黃中提取的天然植物酚類化合物。據文獻報道，姜黃素是一個多靶點治療藥物，對若干疾病，如炎癥性疾病，阿爾茲海默癥、心血管疾病、腫瘤等有治療作用。現代藥理研究表明，姜黃素主要通過抗炎、抗氧化、抑制多種酶類等藥理活性發揮作用。?

目前，尚未見關于姜黃素具有調節BK通道活性的作用的報道。?

發明內容

本發明的目的是提供姜黃素新的藥用用途，涉及姜黃素在制備鉀通道（BK通道）?開放劑中的用途，尤其涉及姜黃素在制備大電導鈣激活鉀通道開放劑中的用途。?

本發明通過細胞實驗，證實了姜黃素能夠顯著增加BK通道的電流，增加BK通道的蛋白表達，以及進一步產生的開放BK通道的用途。?

本發明所述的姜黃素是一種從草本植物姜黃中提取的天然植物酚類化合物，可以按常規方法通過中藥姜黃進行人工提取，或通過市購的渠道獲得。?

本發明以攜帶BK通道基因的pCMV-myc質粒轉染HEK293細胞，使BK通道在HEK293細胞中過表達；采用全細胞膜片鉗的方法研究姜黃素對BK通道電生理活性的影響；用蛋白質免疫印跡實驗（Western?Blot）和細胞表面生物素化方法檢測BK通道總蛋白和細胞膜表面蛋白的表達水平，通過Cycloheximide-based?protein?chase實驗研究姜黃素對BK通道蛋白降解過程的作用。經細胞生物學實驗結果證明，姜黃素具有以下開放BK通道的作用：?

1、增加瞬時轉染BK通道基因的HEK293細胞中BK通道總蛋白的表達。?

2、增大BK通道電流。?

3、增加BK通道蛋白的表面表達。?

4、抑制BK通道蛋白降解途徑，從而穩定BK通道蛋白。?

本發明經細胞實驗結果證明，姜黃素具有開放大電導鈣激活鉀通道的作用，包括對該通道電流的增大作用；對該通道蛋白的總表達和表面表達的增加作用；抑制該通道蛋白的降解途徑，增強其穩定性。?

本發明所述的姜黃素進一步可制備新的大電導鈣激活鉀通道開放劑藥物，用以治療平滑肌功能紊亂相關疾病的藥物，包括治療膀胱過度活動癥、胃蠕動過強等平滑肌功能紊亂相關疾病。?

本發明為姜黃素抗腫瘤，神經保護等的多種藥理作用的機制提供了理論依據；有助于確證BK作為藥物靶標；也為進一步將姜黃素作為大電導鈣激活鉀通道開放劑制備治療膀胱過度活動癥，胃蠕動過強等平滑肌功能紊亂相關疾病的藥物奠定了實驗基礎。?

為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發明的姜黃素作為大電導鈣激活鉀通道開放劑的新用途進行詳細地描述。需要特別指出的是，具體實例和附圖僅是為了說明，顯然本領域的普通技術人員可以根據本文說明，在本發明的范圍內對本發明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發明的范圍內。?

附圖說明

圖1是Western?Blot方法證實瞬時轉染pCMV-myc-BK質粒后BK通道蛋白的過表達圖。?

圖2是姜黃素對BK通道總蛋白的增加作用，?

其中，*：與空白對照相比，P＜0.05。?